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任天青

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白样品解冻后沉淀

各位虫子,我的蛋白样品透析除盐后加了20%甘油,一直保存在-80度冷藏,今天取出来4℃解冻后,立即10,000g离心发现产生不少沉淀(要过柱,除沉淀)。
这是什么原因造成的?莫不是需要恢复道室温让它溶解一段时间吧?该怎么解决?各位同仁请帮忙解答一下。非常感谢!

[ Last edited by 任天青 on 2013-1-19 at 23:55 ]
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
得具体看蛋白的稳定性以及储存条件,解冻最好在正常的储存温度
Followyourheart!
2楼2013-01-20 00:19:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
像这种不稳定的蛋白,你在冷冻之前要加上还原剂的比如DTT,TCEP-HCL。而且溶解时候是要在冰水浴中溶解。
3楼2013-01-21 11:03:36
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Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
沉淀是正常的啊,相互碰撞聚集啊,有效的稳定剂我不知道哪些好用,只有离心然后上柱子了
不想说什么,,,,
4楼2013-01-21 12:13:10
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-22 12:11:22
你的蛋白不稳定吧,冻存之前最好加甘油,DTT之类的,还有冻存的时候也最好稍微提高点盐浓度,这样蛋白比较稳定。

而且解冻的时候,我们实验室之前是用冰水浴解冻的。不过现在37度水浴,快速解冻,这样比冰水浴解冻,蛋白要稳定的多。因为蛋白解冻过程短了,对它的损伤要小一点。
5楼2013-01-21 16:58:29
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-20 00:19:58
得具体看蛋白的稳定性以及储存条件,解冻最好在正常的储存温度

请问怎么查到蛋白质的正常储存温度
6楼2014-09-04 10:25:09
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flll2014

铜虫 (小有名气)

我也遇到这种情况,不知道沉淀还能不能要,我的是没脱盐的,在冰中溶解后就有沉淀,但是晃一晃就没有了,离心后就什么都看不到了。
7楼2014-09-04 11:55:07
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flll2014

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by gelois at 2013-01-21 16:58:29
你的蛋白不稳定吧,冻存之前最好加甘油,DTT之类的,还有冻存的时候也最好稍微提高点盐浓度,这样蛋白比较稳定。

而且解冻的时候,我们实验室之前是用冰水浴解冻的。不过现在37度水浴,快速解冻,这样比冰水浴解 ...

你再37度中解冻会会出现沉淀吗,我在冰水浴中解冻也就半个小时左右,出现了好多沉淀,我的蛋白原先是冻在-80度冰箱的,都不知道沉淀是什么,还能不能用
8楼2014-09-06 11:05:39
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