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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白样品解冻后沉淀
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任天青

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白样品解冻后沉淀

各位虫子，我的蛋白样品透析除盐后加了20%甘油，一直保存在-80度冷藏，今天取出来4℃解冻后，立即10,000g离心发现产生不少沉淀（要过柱，除沉淀）。
这是什么原因造成的？莫不是需要恢复道室温让它溶解一段时间吧？该怎么解决？各位同仁请帮忙解答一下。非常感谢！

[ Last edited by 任天青 on 2013-1-19 at 23:55 ]
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋...
1楼 2013-01-19 23:53:36
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
得具体看蛋白的稳定性以及储存条件，解冻最好在正常的储存温度
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Followyourheart!
2楼2013-01-20 00:19:58
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
像这种不稳定的蛋白，你在冷冻之前要加上还原剂的比如DTT，TCEP-HCL。而且溶解时候是要在冰水浴中溶解。
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3楼2013-01-21 11:03:36
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Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
沉淀是正常的啊，相互碰撞聚集啊，有效的稳定剂我不知道哪些好用，只有离心然后上柱子了
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不想说什么，，，，
4楼2013-01-21 12:13:10
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-22 12:11:22
你的蛋白不稳定吧，冻存之前最好加甘油，DTT之类的，还有冻存的时候也最好稍微提高点盐浓度，这样蛋白比较稳定。

而且解冻的时候，我们实验室之前是用冰水浴解冻的。不过现在37度水浴，快速解冻，这样比冰水浴解冻，蛋白要稳定的多。因为蛋白解冻过程短了，对它的损伤要小一点。
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5楼2013-01-21 16:58:29
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Lester11 at 2013-01-20 00:19:58
得具体看蛋白的稳定性以及储存条件，解冻最好在正常的储存温度

请问怎么查到蛋白质的正常储存温度
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6楼2014-09-04 10:25:09
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flll2014

铜虫 (小有名气)
我也遇到这种情况，不知道沉淀还能不能要，我的是没脱盐的，在冰中溶解后就有沉淀，但是晃一晃就没有了，离心后就什么都看不到了。
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7楼2014-09-04 11:55:07
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flll2014

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by gelois at 2013-01-21 16:58:29
你的蛋白不稳定吧，冻存之前最好加甘油，DTT之类的，还有冻存的时候也最好稍微提高点盐浓度，这样蛋白比较稳定。

而且解冻的时候，我们实验室之前是用冰水浴解冻的。不过现在37度水浴，快速解冻，这样比冰水浴解 ...

你再37度中解冻会会出现沉淀吗，我在冰水浴中解冻也就半个小时左右，出现了好多沉淀，我的蛋白原先是冻在-80度冰箱的，都不知道沉淀是什么，还能不能用
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8楼2014-09-06 11:05:39
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