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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药代动力学 » 蛋白沉淀法处理血浆样品的稳定性
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little-ant

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白沉淀法处理血浆样品的稳定性

如题，小弟做的某化合物在大鼠体内药代实验，血浆处理方法如下：200微升血浆+200微升乙腈+400微升甲醇涡旋2min后离心，上清液过虑，续滤液60微升进样分析hplv-uv.实验已经进行一学期了，血浆的处理结果都很好，空白血浆处理如图中的第一个图，4min后几乎没有杂质峰，但这两天做突然出现问题了，4min后出现一些明显的杂峰，如图中的第二第三图，且5.2min左右的杂峰与我的药体内代谢物的峰保留时间差不多一致，我怀疑过空白血浆、处理样品的甲醇和乙腈以及我的流动相是不是被污染，但经过一一换新的血浆、甲醇乙腈和流动相，问题还是照样出现，请问这问题出在哪里啊？？？
另外我实验的化合物的母体药物的预实验的血浆处理方法也同上，但给药时药物是溶解在20%的1.2-丙二醇里面，静脉注射，液相分析时每个样品都出现如图中的第4个图中接近8min处的峰，而且每个样品该峰面积都差不多，应该不是代谢物，请问这是为什么啊？
希望路过的各位战友帮我分析分析，小弟现在实验卡在这里了，焦虑的很啊，6月份就要中期考核了啊！！
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1楼 2012-05-09 16:07:55
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little-ant

新虫 (小有名气)
都没有人出声，自己顶一下
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2楼2012-05-15 15:51:41
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a83875785

铁杆木虫 (著名写手)
★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-06-21 09:01:12
最好能把你的样品的出峰时间调到10min以后，才能避免血浆内源物及母体化合物的辅料的干扰。
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3楼2012-05-15 16:15:06
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kkbyb

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-06-21 09:01:19
如楼上所说，另外如果你进空白甲醇等溶剂也有就去换预柱或清洗进样阀吧
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4楼2012-05-15 16:22:40
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believe123

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢！ 2012-06-21 09:01:25
血浆处理方法不稳定，计算回收率的稳定性；色谱柱问题，色谱柱用的时间长，效率低了
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5楼2012-06-20 22:20:10
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cj22xmc

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
leecius: 金币+1, 谢谢提供！ 2012-06-21 09:01:31
你的血浆沉淀为什么要用乙腈和甲醇两种溶剂，另外建议进空白溶剂试试。
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mc
6楼2012-06-21 08:35:20
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liu2011

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我之前也做过这个类似的项目，当时也发生过问题，样品要处理的干净，因为动物样品有很多动物源的杂质，对色谱柱柱效的影响还是比较大的，可以去测一下柱效看看，不好的话可能就跟样品没关系了，最好排除柱子的问题，或者进几针试剂的空白样
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7楼2012-06-27 12:42:17
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