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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 药学 » 药物分析 » 【求助】关于血浆样品处理
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WLH$LH

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助】关于血浆样品处理

最近在做药动，知道极性大的药一般用沉淀蛋白，极性小的用液液萃取，想问一下血浆蛋白结合率与样品处理有什么关系？听说结合率大应该用沉淀蛋白，有这么一说吗，多谢各位了！
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1楼 2011-03-26 19:54:45
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gabriella

新虫 (小有名气)
WLH$LH(金币+1): 2011-03-31 14:54:51
血浆结合率大的 是不是提取回收率低？蛋白沉淀的同时，药物会跟着沉淀么？
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2楼2011-03-26 21:26:46
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
★ ★
dream意(金币+1): 2011-03-29 16:33:47
jiangchunyong(金币+1): 谢谢！ 2011-03-29 16:55:06
WLH$LH(金币+1): 2011-03-31 14:51:14
液液萃取和蛋白沉淀一般都会使蛋白结合效应消失
即这两种方法测得的都是游离+结合的药物浓度
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3楼2011-03-29 16:30:50
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WLH$LH

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2011-03-29 16:30:50:
液液萃取和蛋白沉淀一般都会使蛋白结合效应消失
即这两种方法测得的都是游离+结合的药物浓度

我的意思是血浆蛋白结合率低的化合物是不是不推荐沉淀蛋白，记得师姐答辨时有个人沉淀蛋白处理样品提取回收率不高，老师就怀疑他的血浆蛋白结合率低！我也不清楚，到底怎么解释，不过还是谢谢！
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4楼2011-03-31 14:53:20
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WLH$LH

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by gabriella at 2011-03-26 21:26:46:
血浆结合率大的 是不是提取回收率低？蛋白沉淀的同时，药物会跟着沉淀么？

我觉得你和我说的正好相反，具体怎样才是对的我也不知道！
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5楼2011-03-31 14:54:17
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
★
novus(金币+1): 多谢指教！ 2011-04-01 19:10:29
引用回帖:
Originally posted by WLH$LH at 2011-03-31 14:53:20:
我的意思是血浆蛋白结合率低的化合物是不是不推荐沉淀蛋白，记得师姐答辨时有个人沉淀蛋白处理样品提取回收率不高，老师就怀疑他的血浆蛋白结合率低！我也不清楚，到底怎么解释，不过还是谢谢！

在进行蛋白沉淀计算回收率的时候
要考虑血浆是进行了稀释的
比如，100微升血浆加入3倍体积乙腈
最后相当于浓度稀释了4倍，计算回收率要考虑体积稀释问题的
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6楼2011-04-01 09:04:48
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lh_imm

木虫 (正式写手)
WLH$LH(金币+1): 2011-05-04 17:22:28
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2011-04-01 09:04:48:
在进行蛋白沉淀计算回收率的时候
要考虑血浆是进行了稀释的
比如，100微升血浆加入3倍体积乙腈
最后相当于浓度稀释了4倍，计算回收率要考虑体积稀释问题的

我认为如果建立标准曲线所采用的血浆样品处理方法和方法学考察所处理QC所用的血浆样品处理方法相同（一般必然是相同的），计算回收率根本不用考虑稀释的问题。
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7楼2011-04-01 23:30:50
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lh_imm at 2011-04-01 23:30:50:
我认为如果建立标准曲线所采用的血浆样品处理方法和方法学考察所处理QC所用的血浆样品处理方法相同（一般必然是相同的），计算回收率根本不用考虑稀释的问题。

那我们来讨论下

绝对回收率的计算方法：
空白基质中定量加入药物经处理后的峰面积/相同量标准溶液的峰面积

相对回收率的计算方法：
空白基质中定量加入药物经处理后的峰面积/空白基质处理后加入相同量药物所测的峰面积

假如在进行方法学考察时，采用如下处理方法：100微升空白血浆，加入100微升浓度为50微克/毫升的标准溶液，加入100微升内标，采用300微升乙腈进行蛋白沉淀；

血浆样品处理过程时，采用如下处理方法：100微升血浆样品，加入100微升标准溶液的溶剂，加入100微升内标，采用300微升乙腈进行蛋白沉淀；

回收率该如何计算呢？
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8楼2011-04-02 08:48:47
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lh_imm

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by liuzhaomin at 2011-04-02 08:48:47:
那我们来讨论下

绝对回收率的计算方法：
空白基质中定量加入药物经处理后的峰面积/相同量标准溶液的峰面积

相对回收率的计算方法：
空白基质中定量加入药物经处理后的峰面积/空白基质处理后加入相同量药 ...

呵呵，你先去查查资料，把相对回收率的定义和公式搞清楚了再来讨论，要不然是不会有结果的。
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9楼2011-04-02 12:17:49
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liuzhaomin

金虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by lh_imm at 2011-04-02 12:17:49:
呵呵，你先去查查资料，把相对回收率的定义和公式搞清楚了再来讨论，要不然是不会有结果的。

公式就列在上面。

你说的不用考虑稀释的问题，我觉得欠妥。

好比血浆中的浓度是0.1微克/毫升，则100微升血浆中药物总量是10纳克，假设100微升血浆处理后还是100微升溶液复溶，即不稀释，检测时进样体积是10微升，如果浓度0.1微克/毫升的标准溶液的峰面积是3000，回收的样品检测时进样体积也同样是10微升，峰面积是2700，对应的浓度应该是0.09微克/毫升，药物总量是9纳克，绝对回收率=90%；
如果样品处理过程中进行了稀释，最终300微升溶液复溶，检测时进样体积也同样是10微升，峰面积是900，浓度0.1微克/毫升的标准溶液的峰面积还是3000，那么绝对回收率是多少，你的意思是=900/3000=30%么？我觉得应该是900*300/100/3000=90%，因为这300微升复溶的样品中的药物总量还是9纳克，绝对回收率应该用这回收到的9纳克除以血浆中药物的总量，即10纳克。

肯请列出你的计算方法和依据
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10楼2011-04-02 15:10:04
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