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任天青

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白样品解冻后沉淀

各位虫子,我的蛋白样品透析除盐后加了20%甘油,一直保存在-80度冷藏,今天取出来4℃解冻后,立即10,000g离心发现产生不少沉淀(要过柱,除沉淀)。
这是什么原因造成的?莫不是需要恢复道室温让它溶解一段时间吧?该怎么解决?各位同仁请帮忙解答一下。非常感谢!

[ Last edited by 任天青 on 2013-1-19 at 23:55 ]
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
像这种不稳定的蛋白,你在冷冻之前要加上还原剂的比如DTT,TCEP-HCL。而且溶解时候是要在冰水浴中溶解。
3楼2013-01-21 11:03:36
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Lester11

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
得具体看蛋白的稳定性以及储存条件,解冻最好在正常的储存温度
Followyourheart!
2楼2013-01-20 00:19:58
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Allen206

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
沉淀是正常的啊,相互碰撞聚集啊,有效的稳定剂我不知道哪些好用,只有离心然后上柱子了
不想说什么,,,,
4楼2013-01-21 12:13:10
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gelois

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-01-22 12:11:22
你的蛋白不稳定吧,冻存之前最好加甘油,DTT之类的,还有冻存的时候也最好稍微提高点盐浓度,这样蛋白比较稳定。

而且解冻的时候,我们实验室之前是用冰水浴解冻的。不过现在37度水浴,快速解冻,这样比冰水浴解冻,蛋白要稳定的多。因为蛋白解冻过程短了,对它的损伤要小一点。
5楼2013-01-21 16:58:29
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