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chirstopher

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题 已有1人参与

各位研友:
             最近在做利用HPLC检测酵母菌的ATP含量的实验。样品中检测不出和标品相同时间的ATP出峰,不知道是什么原因。求助各位做过类似实验的前辈们指点,如能提供相关的方法文献,不胜感激。谢谢!

提取条件:TCA(三氯乙酸)做蛋白沉淀剂。  超声破碎细胞
流动条件:柱子:C18
             流动相:A 10nM 磷酸缓冲液(pH 6.5)
                               B 甲醇(100%)
              等度洗脱ATP
                         条件:0-10min    5%  甲醇
                                   10-20min   100%
                                   20-30min    5% (10min—30min为洗柱子和平衡过程,因为经查文献ATP一般在10分钟内出峰)


结果如图:红色为样品的检测结果,灰色为标品的检测结果,蓝色为标品和样品等体积混合结果。

求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题
混合图.png
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
是不是你的ATP浓度不对,造成洗脱时稀释,然后低于检测限了?
2楼2014-05-21 12:54:34
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chirstopher

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-05-21 12:54:34
是不是你的ATP浓度不对,造成洗脱时稀释,然后低于检测限了?

嗯,可能是个原因。我记得当时做的时候没有注意最低检测限度。国内做酵母ATP检测的少,多半都是发酵泥提取ATP,我们实验室是锥形瓶摇菌后,提取,所以感觉量会相对少些。请问你那边有什么好的提取方法建议吗?谢谢了。
3楼2014-05-28 10:07:18
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wolfman840

木虫 (正式写手)

引用回帖:
3楼: Originally posted by chirstopher at 2014-05-28 10:07:18
嗯,可能是个原因。我记得当时做的时候没有注意最低检测限度。国内做酵母ATP检测的少,多半都是发酵泥提取ATP,我们实验室是锥形瓶摇菌后,提取,所以感觉量会相对少些。请问你那边有什么好的提取方法建议吗?谢谢 ...

对于ATP的提取我没有好的办法,还是建议你查查文献吧。这个帮不了你呢
4楼2014-05-29 16:52:07
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钴蓝星域

铜虫 (初入文坛)

亲,还在么?求问你买的标样是ATP的二钠盐,还是什么呀?
喵?
5楼2015-04-23 13:05:42
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