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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题
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chirstopher

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题 已有1人参与

各位研友：
             最近在做利用HPLC检测酵母菌的ATP含量的实验。样品中检测不出和标品相同时间的ATP出峰，不知道是什么原因。求助各位做过类似实验的前辈们指点，如能提供相关的方法文献，不胜感激。谢谢！

提取条件：TCA（三氯乙酸）做蛋白沉淀剂。  超声破碎细胞
流动条件：柱子：C18
             流动相：A 10nM 磷酸缓冲液（pH 6.5）
                               B 甲醇（100%）
              等度洗脱ATP
                         条件：0-10min    5%  甲醇
                                   10-20min   100%
                                   20-30min    5% （10min—30min为洗柱子和平衡过程，因为经查文献ATP一般在10分钟内出峰）


结果如图：红色为样品的检测结果，灰色为标品的检测结果，蓝色为标品和样品等体积混合结果。

求助如何利用HPLC 测定ATP 含量的问题
混合图.png
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1楼 2014-05-19 09:38:47
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wolfman840

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by chirstopher at 2014-05-28 10:07:18
嗯，可能是个原因。我记得当时做的时候没有注意最低检测限度。国内做酵母ATP检测的少，多半都是发酵泥提取ATP，我们实验室是锥形瓶摇菌后，提取，所以感觉量会相对少些。请问你那边有什么好的提取方法建议吗？谢谢 ...

对于ATP的提取我没有好的办法，还是建议你查查文献吧。这个帮不了你呢
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4楼2014-05-29 16:52:07
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是不是你的ATP浓度不对，造成洗脱时稀释，然后低于检测限了？
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2楼2014-05-21 12:54:34
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chirstopher

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by wolfman840 at 2014-05-21 12:54:34
是不是你的ATP浓度不对，造成洗脱时稀释，然后低于检测限了？

嗯，可能是个原因。我记得当时做的时候没有注意最低检测限度。国内做酵母ATP检测的少，多半都是发酵泥提取ATP，我们实验室是锥形瓶摇菌后，提取，所以感觉量会相对少些。请问你那边有什么好的提取方法建议吗？谢谢了。
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3楼2014-05-28 10:07:18
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钴蓝星域

铜虫 (初入文坛)
亲，还在么？求问你买的标样是ATP的二钠盐，还是什么呀？
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喵？
5楼2015-04-23 13:05:42
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