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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 化学化工区 » 分析 » 色谱质谱 » HPLC 含量测定
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wqj947891

新虫 (小有名气)

[交流] HPLC 含量测定

HPLC  含量测定   
在254nm的时候，测得目标产物的含量很高有90%多吧；但是换个波长如220nm左右，又出现了一个杂峰，含量就变成只有50多了。按面积百分比算的，我要定量，是不是要选出峰最多的波长？不过这样测得基线不稳。怎么办？
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1楼 2011-12-26 16:52:33
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痴夷子皮

版主 (文坛精英)
★
wqj947891(金币+1):谢谢参与
做紫外，选择最大吸收波长。
做含量，不是做有关物质，杂质峰可以先不管。
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2楼2011-12-26 17:11:06
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huazhzh

木虫 (正式写手)
★
wqj947891(金币+1):谢谢参与
怎么最近看到这么多人喜欢用HPLC定量呢，用紫外很不准的啊，要选择合适的波长，甚至标样什么的，多麻烦。如果杂质数量不是特别的多定量要求又不苛刻的话，做个氢谱看积分也比紫外准多了啊
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3楼2011-12-26 17:58:53
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lantao8823

铁虫 (小有名气)
★
wqj947891(金币+1):谢谢参与
HPLC  面积百分比 定量是不精准的，不如外标法和内标法
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4楼2011-12-26 20:23:45
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lemonin2008

铁杆木虫 (正式写手)
★
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波长不一样，紫外吸收不一样
面积归一化法定量不准确
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5楼2011-12-27 07:53:29
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wqj947891

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by huazhzh at 2011-12-26 17:58:53:
怎么最近看到这么多人喜欢用HPLC定量呢，用紫外很不准的啊，要选择合适的波长，甚至标样什么的，多麻烦。如果杂质数量不是特别的多定量要求又不苛刻的话，做个氢谱看积分也比紫外准多了啊

我们产品比较多    254是通用波长   我们产品要测HPLC,LCMS,NMR,不过hplc，lcms都是通用方法，所以觉得不怎么准确。
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6楼2011-12-27 08:00:37
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season987

禁虫 (初入文坛)
★ ★
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408851978(金币+1): 常来看看啊 2011-12-27 12:27:37
本帖内容被屏蔽
7楼2011-12-27 09:53:21
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wqj947891

新虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by lantao8823 at 2011-12-26 20:23:45:
HPLC  面积百分比 定量是不精准的，不如外标法和内标法

内标外标  有通用的标准物    样品很多  一个个的换很麻烦
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8楼2011-12-27 11:55:51
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yurong818

禁虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
本帖内容被屏蔽
9楼2011-12-27 14:06:44
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方书磊

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
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西湖醉鱼(金币+1): 感谢分享。 2011-12-28 13:20:17
定量时你说的百分比是归一化法，只能做个大致参考。要想定量你应该用外标法或者内标法。因为内标法比较麻烦，所以通常用外标法。
定量时不是要选出峰最多的波长，如果相关文献或药典没有规定检测波长，一般情况是选一个你要测物质特征峰最强的波长。这样你拿标样的特征峰面积跟你自己的样品进行比较就可以得到含量了。
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10楼2011-12-27 14:29:00
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orionwei

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by huazhzh at 2011-12-26 17:58:53:
怎么最近看到这么多人喜欢用HPLC定量呢，用紫外很不准的啊，要选择合适的波长，甚至标样什么的，多麻烦。如果杂质数量不是特别的多定量要求又不苛刻的话，做个氢谱看积分也比紫外准多了啊

核磁定量同样要选择合适的内标，而且不管是HPLC还是NMR都存在系统误差的问题，而且从实际应用来看，HPLC定量的适用性比NMR要广得多。
个人浅见，多多交流。
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11楼2011-12-27 14:36:21
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abczhan

银虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
做紫外要选择作大吸收波长
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12楼2012-01-09 21:26:20
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guevara1967

铁杆木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
3楼: Originally posted by huazhzh at 2011-12-26 17:58:53:
怎么最近看到这么多人喜欢用HPLC定量呢，用紫外很不准的啊，要选择合适的波长，甚至标样什么的，多麻烦。如果杂质数量不是特别的多定量要求又不苛刻的话，做个氢谱看积分也比紫外准多了啊

不只是“最近”，呵呵，是‘一直’都是用HPLC、GC等色谱手段定量
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13楼2012-01-09 23:09:30
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wqs43

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
看客户的要求来选择分析的紫外波长。HPLC的面积归一化法的含量只是参考值，不是样品的真实含量，要准确定量，还必须有标样，采用外标法或内标法测定。
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14楼2012-01-10 06:35:52
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zhrmghgmn

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
面积归一法要求样品中各组分必须全部出峰，你用面积归一法测定的结果应该是不准确的。可以采用外标法或内标法，在HPLC中，一般用外标法的比较多，选择波长的原则是灵敏度高，干扰小。
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15楼2012-01-10 07:58:33
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