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zhangfengmei

新虫 (初入文坛)

[求助] 高效液相色谱法测定极性较大的化合物时 如何摸索色谱条件

我现在检测的是头孢类药物中的一个中间体   极性很大   类似盐   想用反相液相色谱法检测纯度   没有太多经验  找不到好的液相条件    还请老师们告诉我这类化合物怎么摸索条件      万分感谢  !!!
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低调做人
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ajshen

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhangfengmei: 金币+5, 有帮助, 谢谢 虫友 请问下 一般的C8 C18 的柱子 是不是 不能走纯水啊 谢谢 2013-10-22 13:21:09
首先,药物中间体的结构或者酸碱性是什么?
其次,如果这个中间体极性很大的话用反相色谱可能不太好做,除非用特殊的反相柱,能100%水起步的。
JESSICA
2楼2013-10-22 08:51:50
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tianxia119wo

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
利用高效液相色谱法(HPLC)分析了儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、香豆酸、阿魏酸等六种酚类物质在鲁加1号和鲁加5号苹果浓缩汁中的的含量。色谱条件:色谱柱为Eclipse XDB-C18色谱柱(150mm×4.6mm id,5μm),以甲醇-1%乙酸水溶液作为流动相进行梯度洗脱。柱温30℃,流速为1.0ml/min,检测波长为280nm。在此色谱条件下,各组分均得到很好的分离。经测定鲁加1号苹果浓缩汁中含有儿茶素、绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、香豆酸、阿魏酸等六种酚类物质;鲁加5号苹果浓缩汁中含有较少的绿原酸、咖啡酸、表儿茶素、香豆酸、阿魏酸等五种酚类物质。流动相由甲醇(A)和1%的乙酸水溶液(V/V)(B)两部分组成,溶剂A在40min内由5%上升到30%,对多酚类物质进行分离,然后变为100%,并维持5min。
酚类、羧酸类物质应该算是极性比较大的物质了,希望对你有所帮助。
浙大化学系本科生,希望能和各位虫友多多交流,互相帮助.
3楼2013-10-22 09:14:55
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zhaolianhai

木虫 (正式写手)

用HILLI柱子试试,可以跑纯水,或者对强极性保留较弱的C18、C8柱子,普通C18,95%的水还是可以的
4楼2013-10-22 15:16:45
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ajshen

木虫 (小有名气)

一般的C8,C18是不能走纯水的,只有极性反相色谱柱才能走。一般的反相至少要5%以上的有机溶剂。或者可以像四楼说的,用HILIC柱子,但是就要用亲水色谱的条件了,不是用纯水走了~
JESSICA
5楼2013-10-22 15:55:07
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zhangfengmei

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by ajshen at 2013-10-22 15:55:07
一般的C8,C18是不能走纯水的,只有极性反相色谱柱才能走。一般的反相至少要5%以上的有机溶剂。或者可以像四楼说的,用HILIC柱子,但是就要用亲水色谱的条件了,不是用纯水走了~

谢谢   5%的有机相也不能延长保留时间    这化合物极性太大了   无奈中   但还是很感谢楼主
低调做人
6楼2013-10-22 20:59:51
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hanyxin

木虫 (正式写手)

用纯水相啊  用磷酸盐调节pH至2.5左右 甚至更低
现在很多厂家都有耐纯水的柱子了  
月旭的AQ-C18  LP-C18
WATERS的Altantis dC18 、T3
肥罗门的Hydro-RP
等等
7楼2013-10-22 22:04:06
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mayanshun

金虫 (小有名气)


suruiqin: 金币+1, 鼓励交流,感谢您的参与,欢迎常来分析版~ 2013-10-23 14:46:27
要根据化合物的结构来确定液相分离模式,不是说反相液相对所有的都能进行分析。要用反相的话,在色谱柱能承受的PH范围内,可考虑调整流动相的pH来抑制化合物的离子化,增大疏水作用。
极性大的,比较好的方法是采用亲水色谱作用模式。
8楼2013-10-23 13:53:52
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zhangfengmei

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by hanyxin at 2013-10-22 22:04:06
用纯水相啊  用磷酸盐调节pH至2.5左右 甚至更低
现在很多厂家都有耐纯水的柱子了  
月旭的AQ-C18  LP-C18
WATERS的Altantis dC18 、T3
肥罗门的Hydro-RP
等等

谢谢    我们公司大部分都是  ACE  的柱子   不知道能不能跑纯水
低调做人
9楼2013-10-23 21:01:25
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2005daiyan

金虫 (正式写手)

首先要查看一下中间体的PK值,偏酸性还是偏碱性,
偏酸性,可在buffer里面加些磷酸盐醋酸盐或磷酸三氟乙酸之类的物质条件PH值起到缓冲作用,
偏碱性,可以在buffer里加些四丁基铵之类的物质,调PH为偏碱性(要看色谱柱PH适用范围,选择PH范围宽的色谱柱);
也可以查看其结构,是否会与离子对试剂结合,可以使用离子对试剂,会起到很好的增加保留时间效果的
10楼2013-10-24 08:30:30
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