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弱极性物质的反相液相色谱
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| 最近从微生物代谢产物中分离一个弱极性物质，只溶于石油醚、环己烷这类弱极性有机溶剂中，想做液相看下纯度，用的C18反相柱，这样用石油醚溶解进样可行呢？甲醇/乙腈/水洗脱，大家多多指点经验啊！ |
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2楼2012-12-29 09:39:24
3楼2013-01-01 15:18:03
ruiyi1101
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【答案】应助回帖
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1. 确定是否有紫外吸收、最大吸收波长：可以将样品溶于环己烷中，用紫外分光光度计扫描200～400nm的紫外吸收图谱，先配制1mg/ml的样品溶液，如果大于210nm有峰的紫外吸收值超过1，样品浓度太高，稀释样品，直至大于210nm出现的峰的吸收值在0.6～0.8的范围内。注意测样品前要扫描溶剂扣空白哦！ 2. 考虑样品的溶解性是很重要的，DMSO虽然对许多物质的溶解性很好，但是在色谱上会有很大的溶剂峰，尤其在275nm以下的吸收会很强，这个也是需要在色谱分离时考虑的；用正相色谱做的话，流动相中肯定需要用到正己烷或其他溶剂，在你将样品进到色谱柱前，最好在烧杯中试一下，样品溶液在你打算用的流动相体系中是否互溶是十分重要的，以免出的峰型很差，没有办法解释啥原因。 另外，提醒一下开发正相的方法需要频繁地更换流动相，为了快速平衡系统，尽量不要用脱气机。色谱柱用纯的硅胶柱峰形可能会好一些。 以上是我开发正相色谱法时的一些经验。祝好运！ |
4楼2013-01-07 09:49:21
zhangyuhua12
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5楼2013-01-08 14:27:44