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ss2165

铜虫 (初入文坛)

[求助] 弱极性物质的反相液相色谱

最近从微生物代谢产物中分离一个弱极性物质,只溶于石油醚、环己烷这类弱极性有机溶剂中,想做液相看下纯度,用的C18反相柱,这样用石油醚溶解进样可行呢?甲醇/乙腈/水洗脱,大家多多指点经验啊!
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mikey_m

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
那你的样品紫外下显色吗
如果不显色 做液相紫外检测器是无法检测的
如果显色 即使在甲醇 乙腈的溶解度小 也是要用流动相溶样 不能用与水不溶的有机溶剂溶样
要不就改用正相柱 可以用环己烷配样
2楼2012-12-29 09:39:24
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zly86

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

在这种情况,最好不要用反相,即使要用也只能是非水反相。因为你的样品极性太弱,在有水反相体系中不容,会导致以下一些后果:进样量较少时,峰变形,扭曲,前伸等;进样量稍大,定量环析出,堵塞系统,液相系统压力急剧增高,柱前压可以从100psi到2000多psi;在多一点,会直接堵塞进样针。
对于极性非常弱的样品,最好用正相
3楼2013-01-01 15:18:03
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ruiyi1101

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1. 确定是否有紫外吸收、最大吸收波长:可以将样品溶于环己烷中,用紫外分光光度计扫描200~400nm的紫外吸收图谱,先配制1mg/ml的样品溶液,如果大于210nm有峰的紫外吸收值超过1,样品浓度太高,稀释样品,直至大于210nm出现的峰的吸收值在0.6~0.8的范围内。注意测样品前要扫描溶剂扣空白哦!
2. 考虑样品的溶解性是很重要的,DMSO虽然对许多物质的溶解性很好,但是在色谱上会有很大的溶剂峰,尤其在275nm以下的吸收会很强,这个也是需要在色谱分离时考虑的;用正相色谱做的话,流动相中肯定需要用到正己烷或其他溶剂,在你将样品进到色谱柱前,最好在烧杯中试一下,样品溶液在你打算用的流动相体系中是否互溶是十分重要的,以免出的峰型很差,没有办法解释啥原因。

另外,提醒一下开发正相的方法需要频繁地更换流动相,为了快速平衡系统,尽量不要用脱气机。色谱柱用纯的硅胶柱峰形可能会好一些。

以上是我开发正相色谱法时的一些经验。祝好运!
4楼2013-01-07 09:49:21
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zhangyuhua12

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

只溶于石油醚、环己烷这类弱极性有机溶剂,所以甲醇、乙腈、水是不溶解的,所以反相色谱就不能考虑了。
这样,在紫外有吸收的前提下,可以用正相检测
启动一次
5楼2013-01-08 14:27:44
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