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Daniela_2003

新虫 (小有名气)

[求助] 求助:蛋白变性后还能测浓度吗?

RT,测蛋白浓度时由于一些个人原因,没成功测出。现在蛋白已变性,还能用什么方法测浓度吗?有没有补救措施?之后要用这蛋白做WB。
谢谢~~
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰,不过BCA法可以的,你的标准曲线也做同样的变性处理。
2楼2012-10-23 08:32:54
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 08:32:54
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰,不过BCA法可以的,你的标准曲线也做同样的变性处理。

嗯,好的,谢谢你!我试着做看看,希望可以
Come on !^_^
3楼2012-10-23 12:57:14
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 08:32:54
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰,不过BCA法可以的,你的标准曲线也做同样的变性处理。

再补充一下,我是将5×loading buffer(配β-巯基乙醇)加入蛋白质中,然后100℃ 5min将其变性的,这样处理后对测浓度有影响吗?
Come on !^_^
4楼2012-10-23 13:04:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-24 15:11:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by Daniela_2003 at 2012-10-23 13:04:28
再补充一下,我是将5×loading buffer(配β-巯基乙醇)加入蛋白质中,然后100℃ 5min将其变性的,这样处理后对测浓度有影响吗?...

还原剂对试剂的影响较大,巯基乙醇好像最多可以是0.01%。
实在不行的话可以用丙酮,甲醇,或者TCA沉淀少量样品,重新溶解后定量。
5楼2012-10-24 06:16:39
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-24 06:16:39
还原剂对试剂的影响较大,巯基乙醇好像最多可以是0.01%。
实在不行的话可以用丙酮,甲醇,或者TCA沉淀少量样品,重新溶解后定量。...

好的,谢谢~
Come on !^_^
6楼2012-10-24 15:09:25
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