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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助：蛋白变性后还能测浓度吗？
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)

[求助] 求助：蛋白变性后还能测浓度吗？

RT，测蛋白浓度时由于一些个人原因，没成功测出。现在蛋白已变性，还能用什么方法测浓度吗？有没有补救措施？之后要用这蛋白做WB。
谢谢~~
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1楼 2012-10-22 21:05:08
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰，不过BCA法可以的，你的标准曲线也做同样的变性处理。
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2楼2012-10-23 08:32:54
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 08:32:54
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰，不过BCA法可以的，你的标准曲线也做同样的变性处理。

嗯，好的，谢谢你！我试着做看看，希望可以
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3楼2012-10-23 12:57:14
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-23 08:32:54
有些方法是可以的。很多方法SDS对测定有干扰，不过BCA法可以的，你的标准曲线也做同样的变性处理。

再补充一下，我是将5×loading buffer（配β-巯基乙醇）加入蛋白质中，然后100℃ 5min将其变性的，这样处理后对测浓度有影响吗？
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4楼2012-10-23 13:04:28
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2012-10-24 15:11:50
引用回帖:
4楼: Originally posted by Daniela_2003 at 2012-10-23 13:04:28
再补充一下，我是将5×loading buffer（配β-巯基乙醇）加入蛋白质中，然后100℃ 5min将其变性的，这样处理后对测浓度有影响吗？...

还原剂对试剂的影响较大，巯基乙醇好像最多可以是0.01%。
实在不行的话可以用丙酮，甲醇，或者TCA沉淀少量样品，重新溶解后定量。
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5楼2012-10-24 06:16:39
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Daniela_2003

新虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2012-10-24 06:16:39
还原剂对试剂的影响较大，巯基乙醇好像最多可以是0.01%。
实在不行的话可以用丙酮，甲醇，或者TCA沉淀少量样品，重新溶解后定量。...

好的，谢谢~
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6楼2012-10-24 15:09:25
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