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神的遗孤DD

新虫 (初入文坛)

[求助] TCA法沉淀上清液中蛋白！！！ 已有1人参与

求问大神们，我想检测上清液中的蛋白，收集上清后用的TCA沉淀蛋白（方法是：100%TCA:Sample=1:4冰上孵育30min.然后用的丙酮洗脱的两次，最后用的SDS-PAGE的loading buffer来溶的）这样得到的蛋白直接跑WB，因为细胞外不知道什么蛋白作为内参好，就直接用的丽春红染色，拍照作为内参。请问下诸位有谁知道这样做可行不？还有在提取上清中的蛋白方法有什么问题吗？哪位大神搭救一下！！！万分感激
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1楼 2013-07-30 11:00:27
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spaceman_jia

捐助贵宾 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以透析后浓缩，可以超滤。
不过我不明白你说的上清到底是什么上清。
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2楼2013-07-30 12:52:23
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2008101111

金虫 (正式写手)

学术江湖混子

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-01 12:07:01
TCA沉淀会损失一部分蛋白，如果蛋白含量低的话就用透析袋浓缩，记得截留分子量小点会损失更少的蛋白
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自主创业者，捣腾生物试剂
3楼2013-08-01 10:46:47
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日光海

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

100%TCA:Sample=1:4这个终浓度不太合理吧。看大多数文献TCA的终浓度是10%。合理范围是10%~15%。带我的老师查到冷泉港实验室的一个方案如下。你可以看看http://cshprotocols.cshlp.org/content/2011/8/pdb.prot5651.abstract
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周老湿
4楼2014-04-15 18:27:58
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