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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【交流】提RNA时，75%乙醇洗涤沉淀离心后，如何小心弃掉上清液！？
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伤何处

木虫 (正式写手)

[交流] 【交流】提RNA时，75%乙醇洗涤沉淀离心后，如何小心弃掉上清液！？

如题，今天提植物RNA，使用Trizol试剂提的RNA。在用异丙醇和乙醇沉淀时，不知道怎么去掉上清，感觉看不到沉淀啊？！用枪头吸出来了，但感觉看不到透明的沉淀。。心里好不踏实啊。。大家是怎么做这步的？
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1楼 2013-01-17 14:17:42
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zhang881007

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1, 谢谢参与~ 2013-01-17 18:47:28
侧倾，倒出液体。再用干净的擦镜纸吸出底端残留水分
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2楼2013-01-17 15:49:38
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platanus

木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1, 谢谢~ 2013-01-17 18:47:38
轻轻倒出上清，轻微离心，用处理过的小枪头吸出多余的残液就可以了，另外，提取的RNA看不到沉淀很正常的。
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3楼2013-01-17 16:03:25
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
3楼: Originally posted by platanus at 2013-01-17 16:03:25
轻轻倒出上清，轻微离心，用处理过的小枪头吸出多余的残液就可以了，另外，提取的RNA看不到沉淀很正常的。

我每次倒得时候都怕把沉淀也倒不出来。。那你倒了之后看得到沉淀不？
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4楼2013-01-17 18:48:26
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ccharlien

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-17 18:55:36
对着光一般能看到一些透明的物质在管底
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5楼2013-01-17 18:53:32
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ccharlien at 2013-01-17 18:53:32
对着光一般能看到一些透明的物质在管底

嗯嗯，我经常看到管壁跟管底有一粒粒透明的沉淀。。
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6楼2013-01-17 18:55:34
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dajiong

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1, 谢谢~ 2013-01-18 10:14:02
直接甩掉都没问题啊。先直接倒，然后再离心两分钟，最后用小枪头吸一下就干净了。
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7楼2013-01-18 00:10:54
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1, 谢谢交流~ 2013-01-18 10:14:52
直接倒掉然后把管子倒置在无尘纸上晾。
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8楼2013-01-18 08:19:39
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whubuding

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-18 10:14:56
老师说一般很难看到的。多做几次摸索出自己的感觉就行！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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9楼2013-01-18 08:34:24
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小猫三两只

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-18 10:15:26
提RNA一般就是很难看到，我平时做是先用75%酒精洗一次，再用100%洗一次，这样就很容易晾干，每次洗完都是12000rpm,4度,10min，再直接倒掉就行。如果担心降解，可不用100%洗涤那一步，但可能干的慢一些。
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10楼2013-01-18 08:43:42
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by whubuding at 2013-01-18 08:34:24
老师说一般很难看到的。多做几次摸索出自己的感觉就行！

嗯嗯，看不到总不踏实。。多谢交流~
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11楼2013-01-18 10:15:20
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q317476148

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-18 16:02:33
我一般提动物RNA，几乎 每次都能看到，看不到的时候跑电泳也跑不出来。
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12楼2013-01-18 15:48:05
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yuhan131481

铁虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-19 23:23:09
伤何处: 金币+2, 非常感谢！～ 2013-01-19 23:24:06
倒掉  RNA不会倒出来的  然后用小枪头吸下（注意：离心后RNA都是贴在底部一侧壁上的，从另一侧吸就好）再放置5分钟左右就OK了
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13楼2013-01-19 22:02:55
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-19 23:24:23
我都是倒掉的
一般异丙醇沉淀多长时间在啥温度下沉淀的？
建议如果是6孔板的，我一般室温30-45min
一般都可见沉淀
要是看不到也可能但是还可以做出来的
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14楼2013-01-19 22:21:07
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by mamadexiao at 2013-01-19 22:21:07
我都是倒掉的
一般异丙醇沉淀多长时间在啥温度下沉淀的？
建议如果是6孔板的，我一般室温30-45min
一般都可见沉淀
要是看不到也可能但是还可以做出来的

我都看不到沉淀的，是加异丙醇室温放置～

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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15楼2013-01-19 23:26:00
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lmcyjxs

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1 2013-01-20 16:30:47
我是倾倒上层液体后，再用灭过菌的小枪头慢慢吸取。倒的时候不能甩，假如沉淀粘的不紧，很容易倒出的。吸的时候也要防止沉淀不小心被吸走。。。
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16楼2013-01-20 09:13:39
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mamadexiao

木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+1, 好的，谢啦～ 2013-01-22 23:54:12
伤何处: 金币+1, 嗯嗯~谢谢~ 2013-01-24 11:57:03
引用回帖:
15楼: Originally posted by 伤何处 at 2013-01-19 23:26:00
我都看不到沉淀的，是加异丙醇室温放置～
...

你试试异丙醇加完后，放-20沉淀过夜吧
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17楼2013-01-22 21:58:53
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linaiqin

铁虫 (初入文坛)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
伤何处: 金币+2, 谢谢~ 2013-01-24 11:59:12
伤何处: 金币+1 2013-02-01 11:55:41
经过高速离心后一般RNA都会紧紧的附着在管底，呈白色小片状，直接把离心的管倾斜倒掉上清就可以了，沉淀不会倒出来的，然后再用小枪头吸掉多余的上清，再次点动离心，再除去离心后出现的上清，打开瓶盖让它自然晾干就可以了。有的时候米也出现沉淀也没关系，还是会有RNA 的
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18楼2013-01-24 11:10:48
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伤何处

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by linaiqin at 2013-01-24 11:10:48
经过高速离心后一般RNA都会紧紧的附着在管底，呈白色小片状，直接把离心的管倾斜倒掉上清就可以了，沉淀不会倒出来的，然后再用小枪头吸掉多余的上清，再次点动离心，再除去离心后出现的上清，打开瓶盖让它自然晾干 ...

嗯嗯~那用75%乙醇洗涤沉淀时是用枪头把沉淀都弄起来，吸打几下么？
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19楼2013-02-01 11:56:29
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