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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 基因组分段克隆到载体遇到困难
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匿名

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1楼 2015-03-08 16:07:50
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jinfangli

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我也做过类似的质粒构建：根据我当时的过程，可能你的问题在于
1、在两个大片段连接时要保证两个片段的酶切点一致（尽可能二次酶切提纯）；
2、连接酶选取高效连接酶，体系根据片段大小调整，尽可能单位体系中1:1；
3、转化活化过程延长；
4、摇床高温消毒；
问题估计出在酶切连接上了，这部分解决了后面应该不是问题。
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fight
2楼2015-03-09 11:09:16
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