应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pKD46质粒的提取问题
111/2返回列表12下一页
查看: 3288  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

joker1

银虫 (小有名气)

[求助] pKD46质粒的提取问题 已有2人参与

本人前不久从公司购买含pKD46质粒的细菌进行质粒提取，可用天根质粒提取试剂盒提出的质粒跑电泳6329 bp的pKD46质粒跑在10000bp左右位置。公司解释说是该质粒比较难提，可能是提到的质粒不是超螺旋状态、电泳问题等等（公司提供的质粒电泳图在5000bp左右）。后来按照公司的指导加抗性培养，缩短培养时间多次提取还是没有什么改变。有没有人从网上购买含pKD46质粒的细菌并进行质粒提取啊？关于比较难提取的质粒的相关技术指导资料有哪些?谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
心不开，话不来。
1楼 2015-03-05 11:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jatropha

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:35
你确认用的超螺旋（也就是质粒）marker吗？TaKaRa公式有超螺旋marker，我超喜欢用。
如果不是，建议用超螺旋marker。

还有一个办法，是做一个单酶切，然后用普通的marker检测质粒的大小。

跑质粒，用普通的marker，质粒的位置随着胶浓度的不同和电泳时间的不同，位置是不一样的。
赞一下 回复此楼
2楼2015-03-14 09:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jatropha

银虫 (初入文坛)
另外，pKD46质粒我的实验也很需要。
你能把含pKD46质粒的菌寄个我一份吗？
万分感激！
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-14 09:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一砖头飘死

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:47
如果你用的事Takara的普通的maraker的话，6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常，因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态：超螺旋、闭合环状中间体，还有一个记得不太清楚了，你可以去网上搜搜看。个人建议，鉴定质粒是不是你要的质粒的话，还是找几个酶切下，也就几个小时来验证，最靠谱的。pkd46我们实验室也是从公司买的，提的时候也没啥问题呀^
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-14 09:34:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joker1

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-14 09:34:43
如果你用的事Takara的普通的maraker的话，6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常，因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态：超螺旋、闭合环状中间体，还有一个记得不太清楚了，你可以去网上搜搜看。个人建议，鉴定质粒 ...

不是10000bp有条带，而是提的质粒只有在10000bp以上的一条带；我在网上查看别人提的pKD46质粒跑的条带和公司提供的电泳图都在5000bp左右。另外，我用Pst I 酶切后感觉两者大小都差不多。
赞一下 回复此楼
心不开，话不来。
5楼2015-03-14 12:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joker1

银虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by Jatropha at 2015-03-14 09:22:04
另外，pKD46质粒我的实验也很需要。
你能把含pKD46质粒的菌寄个我一份吗？
万分感激！

我还在确认这个质粒对不对
赞一下 回复此楼
心不开，话不来。
6楼2015-03-14 12:21:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jatropha

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by joker1 at 2015-03-14 12:21:24
我还在确认这个质粒对不对...

最快的方法是用pKD46质粒里面的酶切位点，用你们实验室已经有的限制性内切酶做个酶切。多做几种，有单酶切，也有双酶切甚至3酶切。
没有酶切位点的也可以试试，如果能切开，那就说明质粒有问题。

(  1) BamHI     : GGATCC               :   1 Sites
      1155- 1154:  6329 base

( 2) EcoRI     : GAATTC               :   2 Sites
      2725- 1215:  4820 base
      1216- 2724:  1509 base

( 3) EcoRV     : GATATC               :   1 Sites
       302-  301:  6329 base

( 4) NcoI      : CCATGG               :   1 Sites
      3390- 3389:  6329 base

( 5) NotI      : GCGGCCGC             :   1 Sites
      4834- 4833:  6329 base

( 5) PstI      : CTGCAG               :   2 Sites
      2471- 2223:  6082 base
      2224- 2470:   247 base

( 6) SacI      : GAGCTC               :   1 Sites
      1226- 1225:  6329 base

( 7) SalI      : GTCGAC               :   1 Sites
      1727- 1726:  6329 base

( 8) SpeI      : ACTAGT               :   1 Sites
      4514- 4513:  6329 base

没有酶切位点的：
HindIII    KpnI       NdeI       NheI      
SfiI       XbaI       XhoI
赞一下 回复此楼
7楼2015-03-15 08:21:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jatropha

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-14 09:34:43
如果你用的事Takara的普通的maraker的话，6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常，因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态：超螺旋、闭合环状中间体，还有一个记得不太清楚了，你可以去网上搜搜看。个人建议，鉴定质粒 ...

个人的经验，看质粒大小还是用TaKaRa的超螺旋marker，以我们提的质粒最前面的一条带（超螺旋）为准。

我的实验现在也很需要pKD46质粒，不知道您是否方便给我一份。
赞一下 回复此楼
8楼2015-03-15 08:24:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joker1

银虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by Jatropha at 2015-03-15 08:24:55
个人的经验，看质粒大小还是用TaKaRa的超螺旋marker，以我们提的质粒最前面的一条带（超螺旋）为准。

我的实验现在也很需要pKD46质粒，不知道您是否方便给我一份。...

如果真的需要的话我可以把摇的菌液给你一份。
赞一下 回复此楼
心不开，话不来。
9楼2015-03-15 19:26:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joker1

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by Jatropha at 2015-03-15 08:21:09
最快的方法是用pKD46质粒里面的酶切位点，用你们实验室已经有的限制性内切酶做个酶切。多做几种，有单酶切，也有双酶切甚至3酶切。
没有酶切位点的也可以试试，如果能切开，那就说明质粒有问题。

(  1) BamHI  ...

降低胶的浓度，提的质粒跑的条带一下就到5000bp左右了，酶切还没怎么做。
赞一下 回复此楼
心不开，话不来。
10楼2015-03-15 19:31:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 joker1 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +6 Isak0320 2026-10-12 9/450 2026-10-12 21:13 by Isak0320
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +4 wangyl_123 2026-10-10 8/400 2026-10-12 18:09 by wangyl_123
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 6/300 2026-10-12 14:55 by 简单化xn
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭