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BL21菌种提取质粒的问题 已有3人参与
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| 新手我已经确定构建好了一个真核表达载体，菌落PCR一直有目的条带，之后挑了单克隆摇菌在化板，再做菌落PCR还是有的，阴性和阳性对照都做过，没有问题，说明载体已经构建成功，由于手里没有用于克隆的DH5a,JM109等菌，就转化到了用于表达的BL21菌里，摇菌到一定浓度后，再去提质粒发现加入裂解液2后一直是浑浊的，但是裂解没有重组子的BL21立马就变清亮了，说明裂解液2没有问题，但是BL21里提取出来的质粒特别的少，而且感觉很不稳定（单双酶切发现都不对），但是具体不知道是什么原因，想请高手们找下原因，给我分析一下，是不是BL21不适合做质粒提取啊？但是都是大肠杆菌，那为什么重组子BL21菌加入裂解液后很难变清亮呢？（但是我又确定重组子BL21已经裂解了，因为我发现加入裂解液II后菌液变得粘稠而且有很多拉丝状的液体，听说那是菌体裂解后的核酸）。求高手解释。。本人感激不尽。。。。 |
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