应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » pKD46质粒的提取问题
51/1返回列表
查看: 2717  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

joker1

银虫 (小有名气)

[求助] pKD46质粒的提取问题 已有2人参与

本人前不久从公司购买含pKD46质粒的细菌进行质粒提取，可用天根质粒提取试剂盒提出的质粒跑电泳6329 bp的pKD46质粒跑在10000bp左右位置。公司解释说是该质粒比较难提，可能是提到的质粒不是超螺旋状态、电泳问题等等（公司提供的质粒电泳图在5000bp左右）。后来按照公司的指导加抗性培养，缩短培养时间多次提取还是没有什么改变。有没有人从网上购买含pKD46质粒的细菌并进行质粒提取啊？关于比较难提取的质粒的相关技术指导资料有哪些?谢谢了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
心不开，话不来。
1楼 2015-03-05 11:46:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Jatropha

银虫 (初入文坛)
另外，pKD46质粒我的实验也很需要。
你能把含pKD46质粒的菌寄个我一份吗？
万分感激！
赞一下 回复此楼
3楼2015-03-14 09:22:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

Jatropha

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:35
你确认用的超螺旋（也就是质粒）marker吗？TaKaRa公式有超螺旋marker，我超喜欢用。
如果不是，建议用超螺旋marker。

还有一个办法，是做一个单酶切，然后用普通的marker检测质粒的大小。

跑质粒，用普通的marker，质粒的位置随着胶浓度的不同和电泳时间的不同，位置是不一样的。
赞一下 回复此楼
2楼2015-03-14 09:19:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一砖头飘死

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:47
如果你用的事Takara的普通的maraker的话，6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常，因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态：超螺旋、闭合环状中间体，还有一个记得不太清楚了，你可以去网上搜搜看。个人建议，鉴定质粒是不是你要的质粒的话，还是找几个酶切下，也就几个小时来验证，最靠谱的。pkd46我们实验室也是从公司买的，提的时候也没啥问题呀^
赞一下 回复此楼
4楼2015-03-14 09:34:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

joker1

银虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-14 09:34:43
如果你用的事Takara的普通的maraker的话，6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常，因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态：超螺旋、闭合环状中间体，还有一个记得不太清楚了，你可以去网上搜搜看。个人建议，鉴定质粒 ...

不是10000bp有条带，而是提的质粒只有在10000bp以上的一条带；我在网上查看别人提的pKD46质粒跑的条带和公司提供的电泳图都在5000bp左右。另外，我用Pst I 酶切后感觉两者大小都差不多。
赞一下 回复此楼
心不开，话不来。
5楼2015-03-14 12:16:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭