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joker1

银虫 (小有名气)

[求助] pKD46质粒的提取问题 已有2人参与

本人前不久从公司购买含pKD46质粒的细菌进行质粒提取,可用天根质粒提取试剂盒提出的质粒跑电泳6329 bp的pKD46质粒跑在10000bp左右位置。公司解释说是该质粒比较难提,可能是提到的质粒不是超螺旋状态、电泳问题等等(公司提供的质粒电泳图在5000bp左右)。后来按照公司的指导加抗性培养,缩短培养时间多次提取还是没有什么改变。有没有人从网上购买含pKD46质粒的细菌并进行质粒提取啊?关于比较难提取的质粒的相关技术指导资料有哪些?谢谢了!
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心不开,话不来。
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joker1

银虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 一砖头飘死 at 2015-03-14 09:34:43
如果你用的事Takara的普通的maraker的话,6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常,因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态:超螺旋、闭合环状中间体,还有一个记得不太清楚了,你可以去网上搜搜看。个人建议,鉴定质粒 ...

不是10000bp有条带,而是提的质粒只有在10000bp以上的一条带;我在网上查看别人提的pKD46质粒跑的条带和公司提供的电泳图都在5000bp左右。另外,我用Pst I 酶切后感觉两者大小都差不多。
心不开,话不来。
5楼2015-03-14 12:16:06
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Jatropha

银虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:35
你确认用的超螺旋(也就是质粒)marker吗?TaKaRa公式有超螺旋marker,我超喜欢用。
如果不是,建议用超螺旋marker。

还有一个办法,是做一个单酶切,然后用普通的marker检测质粒的大小。

跑质粒,用普通的marker,质粒的位置随着胶浓度的不同和电泳时间的不同,位置是不一样的。
2楼2015-03-14 09:19:22
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Jatropha

银虫 (初入文坛)

另外,pKD46质粒我的实验也很需要。
你能把含pKD46质粒的菌寄个我一份吗?
万分感激!
3楼2015-03-14 09:22:04
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一砖头飘死

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
joker1: 金币+30, ★★★很有帮助 2015-03-14 12:15:47
如果你用的事Takara的普通的maraker的话,6329bp的质粒在10000bp有条带也很正常,因为一般试剂盒提取到的质粒有三种形态:超螺旋、闭合环状中间体,还有一个记得不太清楚了,你可以去网上搜搜看。个人建议,鉴定质粒是不是你要的质粒的话,还是找几个酶切下,也就几个小时来验证,最靠谱的。pkd46我们实验室也是从公司买的,提的时候也没啥问题呀^
4楼2015-03-14 09:34:43
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