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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » maker中间有很多不清晰的条带是什么情况
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)

[交流] maker中间有很多不清晰的条带是什么情况已有6人参与

我跑的胶maker应该是只有六个条带，但是再六个主要的条带之间有很多不是很清晰的条带，想问这个是变性不充分的问题么？延长变性时间是不是会好一点。

maker中间有很多不清晰的条带是什么情况
maker的问题.jpg
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1楼2015-02-28 10:58:57
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
而且跑到低分子量之后的条带就很不清楚了，基本上变成了一团，有什么解决的方法么。
我的方法是上层堆积胶浓度4%，下层分离胶浓度12%。每孔上样量20ul，保证蛋白质浓度在100ug/ml以上。70v跑30min，110v跑90min（但基本上这个时间跑不完，需要大概两个小时）。是不是分离胶跑的电压有点小，时间有点长造成的。
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2楼2015-02-28 11:02:08
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十七--十七

银虫 (正式写手)
★
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不是时间造成的，具体不清楚。确保maker没有放坏？
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3楼2015-02-28 11:05:16
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 十七--十七 at 2015-02-28 11:05:16
不是时间造成的，具体不清楚。确保maker没有放坏？

maker是新买分装的，solarbio公司的。
延长电泳的时间不会造成条带模糊么？
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4楼2015-02-28 11:39:41
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废哥117

银虫 (小有名气)
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我们之前买的Marker，分装之前，我们都要煮一下的，还有溴酚蓝有没有跑出去啊
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不断提高自己
5楼2015-02-28 15:56:00
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ASWDR

金虫 (小有名气)
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下次再跑时别按时间跑，等溴酚蓝带跑过浓缩胶与分离胶交界线后再升高电压跑跑看

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6楼2015-02-28 22:20:36
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ASWDR

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by 废哥117 at 2015-02-28 15:56:00
我们之前买的Marker，分装之前，我们都要煮一下的，还有溴酚蓝有没有跑出去啊

应该不需要煮，我们买的Maker都是直接点样的，跑的效果都很好

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7楼2015-02-28 22:22:08
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by ASWDR at 2015-02-28 22:22:08
应该不需要煮，我们买的Maker都是直接点样的，跑的效果都很好
...

你用的maker是预染的么？我听客服人员说过。
我是按照maker说明书上的方法做的，买来的样品（蛋白干粉）加入自带的上样缓冲液，之后沸水加热5min，分装，-20℃保存，需要用的时候拿出来重新加热5min，之后点样。
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8楼2015-03-01 14:18:47
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ASWDR

金虫 (小有名气)
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引用回帖:
8楼: Originally posted by 在下狒狒 at 2015-03-01 14:18:47
你用的maker是预染的么？我听客服人员说过。
我是按照maker说明书上的方法做的，买来的样品（蛋白干粉）加入自带的上样缓冲液，之后沸水加热5min，分装，-20℃保存，需要用的时候拿出来重新加热5min，之后点样。...

恩，是的，我们的是有染料的，蓝色液体

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9楼2015-03-01 15:33:26
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ASWDR

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by ASWDR at 2015-03-01 15:33:26
恩，是的，我们的是有染料的，蓝色液体
...

这么说来，可能是你的maker处理过程有问题导致的。一般跑蛋白质之前，加完染料要沸水浴3分钟，破坏蛋白质空间结构。不过，这种Maker就不知道了

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10楼2015-03-01 15:40:49
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