maker中间有很多不清晰的条带是什么情况 - 生物科学 - 蛋白电泳/WB

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二妖酱

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marker变性不充分吧。我用的marker都是直接点样的，但是我们样品每次用都要95℃变性10min。自己配的maker这样处理应该也会好一点。

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走走停停~停停走走~风景就在眼前

11楼2015-03-01 16:15:21

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2楼: Originally posted by 在下狒狒 at 2015-02-28 11:02:08
而且跑到低分子量之后的条带就很不清楚了，基本上变成了一团，有什么解决的方法么。
我的方法是上层堆积胶浓度4%，下层分离胶浓度12%。每孔上样量20ul，保证蛋白质浓度在100ug/ml以上。70v跑30min，110v跑90min（但 ...

是不是后来电压太大小分子来不及停都聚一起了（猜的）。我一直都是一个电压跑，80左右，没出现过这个状况，我觉得一个电压跑的更稳，但是很慢。

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12楼2015-03-01 16:24:24

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在下狒狒

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10楼: Originally posted by ASWDR at 2015-03-01 15:40:49
这么说来，可能是你的maker处理过程有问题导致的。一般跑蛋白质之前，加完染料要沸水浴3分钟，破坏蛋白质空间结构。不过，这种Maker就不知道了
...

谢谢回答，向客服反映了问题，答应重新发一个新生产的maker给我。按照说明说指示，maker点样前的加热时间3-5min，我决定下次试验缩短加热时间到3min。

同时我在想，样品上样前煮沸时间过长会不会导致样品降解，我在看不同的protocols的时候，加热时间从5min到10min不等，我都是选择。如果杂带是maker样品降解引起的，那么如何保证样品加热过程中不降解呢？最初思考这个问题的时候我想不同的protocols时间不同，表明时间在这个实验中应该不是影响结果的一个变量吧！

归根到底一个问题，上样前加热时间过长时候会导致样品降解？

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13楼2015-03-02 09:27:26

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12楼: Originally posted by 二妖酱 at 2015-03-01 16:24:24
是不是后来电压太大小分子来不及停都聚一起了（猜的）。我一直都是一个电压跑，80左右，没出现过这个状况，我觉得一个电压跑的更稳，但是很慢。
...

谢谢回答，您的意思是说从堆积胶到分离胶都是一直80v不变么？我在想这个是不是和电流有关系，因为在跑胶过程中，我发现随着跑胶时间的延长，电流会下降。开始我觉得是两块玻璃板之前的液槽缓冲液变少的缘故，所以在以前跑胶的中间我会停下来，补充中间液槽的缓冲溶液，不过后来发现这样效果并不明显，而且为了保证电泳过程的连续性，现在已经不这么做了。您在电泳过程中有这个问题么？