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在下狒狒

新虫 (初入文坛)

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[交流] maker中间有很多不清晰的条带是什么情况已有6人参与

我跑的胶maker应该是只有六个条带，但是再六个主要的条带之间有很多不是很清晰的条带，想问这个是变性不充分的问题么？延长变性时间是不是会好一点。

maker的问题.jpg

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1楼2015-02-28 10:58:57

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在下狒狒

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引用回帖:

12楼: Originally posted by 二妖酱 at 2015-03-01 16:24:24
是不是后来电压太大小分子来不及停都聚一起了（猜的）。我一直都是一个电压跑，80左右，没出现过这个状况，我觉得一个电压跑的更稳，但是很慢。
...

谢谢回答，您的意思是说从堆积胶到分离胶都是一直80v不变么？我在想这个是不是和电流有关系，因为在跑胶过程中，我发现随着跑胶时间的延长，电流会下降。开始我觉得是两块玻璃板之前的液槽缓冲液变少的缘故，所以在以前跑胶的中间我会停下来，补充中间液槽的缓冲溶液，不过后来发现这样效果并不明显，而且为了保证电泳过程的连续性，现在已经不这么做了。您在电泳过程中有这个问题么？

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14楼2015-03-02 09:32:44

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在下狒狒

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而且跑到低分子量之后的条带就很不清楚了，基本上变成了一团，有什么解决的方法么。
我的方法是上层堆积胶浓度4%，下层分离胶浓度12%。每孔上样量20ul，保证蛋白质浓度在100ug/ml以上。70v跑30min，110v跑90min（但基本上这个时间跑不完，需要大概两个小时）。是不是分离胶跑的电压有点小，时间有点长造成的。

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2楼2015-02-28 11:02:08

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