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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » maker中间有很多不清晰的条带是什么情况
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)

[交流] maker中间有很多不清晰的条带是什么情况 已有6人参与

我跑的胶maker应该是只有六个条带，但是再六个主要的条带之间有很多不是很清晰的条带，想问这个是变性不充分的问题么？延长变性时间是不是会好一点。

maker中间有很多不清晰的条带是什么情况
maker的问题.jpg
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1楼 2015-02-28 10:58:57
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by ASWDR at 2015-03-01 15:40:49
这么说来，可能是你的maker处理过程有问题导致的。一般跑蛋白质之前，加完染料要沸水浴3分钟，破坏蛋白质空间结构。不过，这种Maker就不知道了
...

谢谢回答，向客服反映了问题，答应重新发一个新生产的maker给我。按照说明说指示，maker点样前的加热时间3-5min，我决定下次试验缩短加热时间到3min。

同时我在想，样品上样前煮沸时间过长会不会导致样品降解，我在看不同的protocols的时候，加热时间从5min到10min不等，我都是选择。如果杂带是maker样品降解引起的，那么如何保证样品加热过程中不降解呢？最初思考这个问题的时候我想不同的protocols时间不同，表明时间在这个实验中应该不是影响结果的一个变量吧！

归根到底一个问题，上样前加热时间过长时候会导致样品降解？
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13楼2015-03-02 09:27:26
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
而且跑到低分子量之后的条带就很不清楚了，基本上变成了一团，有什么解决的方法么。
我的方法是上层堆积胶浓度4%，下层分离胶浓度12%。每孔上样量20ul，保证蛋白质浓度在100ug/ml以上。70v跑30min，110v跑90min（但基本上这个时间跑不完，需要大概两个小时）。是不是分离胶跑的电压有点小，时间有点长造成的。
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2楼2015-02-28 11:02:08
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十七--十七

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
不是时间造成的，具体不清楚。确保maker没有放坏？
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3楼2015-02-28 11:05:16
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在下狒狒

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 十七--十七 at 2015-02-28 11:05:16
不是时间造成的，具体不清楚。确保maker没有放坏？

maker是新买分装的，solarbio公司的。
延长电泳的时间不会造成条带模糊么？
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4楼2015-02-28 11:39:41
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