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maweisimple铁虫 (小有名气)
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[交流]
荧光PCR 内控
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| 大家好，最近在思考，实时荧光PCR的试剂往往除了阳性质控品，还添加另一种荧光信号的内控，有些不解，阳性质控品不就是证明试剂没问题的吗，如果阳性质控有信号，外控无信号，说明提取的样本有抑制，而反应试剂是没问题，为什么还要加内控呢？请大家各抒己见，不吝赐教！ |
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 QPCR 问题简答 |
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maweisimple: 金币+3, 很棒 2015-02-10 16:49:07
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maweisimple: 金币+3, 很棒 2015-02-10 16:49:07
| 阳性质控，是为了说明你的试剂没有问题，由于阳性质控并不和你的具体的每一个样本一管扩增。而有时候某个样本是阴性，但是你无法判断是由于真的是阴性呢还是标本有抑制物导致的阴性，这时候就引入内控，也就是所谓的内标，它分两种，一种是管家基因，一种是额外添加进去的质粒或者其它（正常的样本内控或内标就肯定为阳性），和样本一起参与提取，这时候如果标本的目的片段是阴性，而内标也是阴性，说明这个标本可能有抑制物，因为连内标都没有出来，可以稀释下临床样本进行检测，而如果标本的目的片段是阴性，而内标是阳性，那么结果为正常，即，此份样本你的目的片段为阴性，不知道这样解释你是否明白。内标主要用来考察样本扩增的假阴性！ |
3楼2015-02-10 15:57:42
lovelydong
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maweisimple: 金币+1 2015-02-11 12:44:43
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maweisimple: 金币+1 2015-02-11 12:44:43
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测定的DNA是你提取的总DNA，未必含有你外标那段基因（当然也只有极端的情况才会出现这种情况），这个时候引入的各种阳性质控、外标以及内标才能发挥它们的作用，辅助你分析问题所在。不知道这样解释能否帮助你？ |
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maweisimple7楼2015-02-11 10:28:57
maweisimple
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