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maweisimple

铁虫 (小有名气)

[交流] 荧光PCR 内控

大家好,最近在思考,实时荧光PCR的试剂往往除了阳性质控品,还添加另一种荧光信号的内控,有些不解,阳性质控品不就是证明试剂没问题的吗,如果阳性质控有信号,外控无信号,说明提取的样本有抑制,而反应试剂是没问题,为什么还要加内控呢?请大家各抒己见,不吝赐教!
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by lovelydong at 2015-02-11 10:28:57
测定的DNA是你提取的总DNA,未必含有你外标那段基因(当然也只有极端的情况才会出现这种情况),这个时候引入的各种阳性质控、外标以及内标才能发挥它们的作用,辅助你分析问题所在。不知道这样解释能否帮助你?...

嗯嗯,明白。现在的问题是,内控扩增对我的目的片段扩增有很大干扰,尤其是低突变水平的,基本检不出来了,所以才不想加内控了。不知道有没有更好的办法?
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8楼2015-02-11 12:43:34
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bbbobo

木虫 (小有名气)


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★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
maweisimple: 金币+1, 谢谢 2015-02-10 16:53:34
内参一方面是证明试剂体系没问题,另一方面是进行相对定量
2楼2015-02-10 15:16:59
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love_st

金虫 (著名写手)


★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
maweisimple: 金币+3, 很棒 2015-02-10 16:49:07
阳性质控,是为了说明你的试剂没有问题,由于阳性质控并不和你的具体的每一个样本一管扩增。而有时候某个样本是阴性,但是你无法判断是由于真的是阴性呢还是标本有抑制物导致的阴性,这时候就引入内控,也就是所谓的内标,它分两种,一种是管家基因,一种是额外添加进去的质粒或者其它(正常的样本内控或内标就肯定为阳性),和样本一起参与提取,这时候如果标本的目的片段是阴性,而内标也是阴性,说明这个标本可能有抑制物,因为连内标都没有出来,可以稀释下临床样本进行检测,而如果标本的目的片段是阴性,而内标是阳性,那么结果为正常,即,此份样本你的目的片段为阴性,不知道这样解释你是否明白。内标主要用来考察样本扩增的假阴性!
3楼2015-02-10 15:57:42
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maweisimple

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by love_st at 2015-02-10 15:57:42
阳性质控,是为了说明你的试剂没有问题,由于阳性质控并不和你的具体的每一个样本一管扩增。而有时候某个样本是阴性,但是你无法判断是由于真的是阴性呢还是标本有抑制物导致的阴性,这时候就引入内控,也就是所谓的 ...

嗯嗯,但是针对每个样本,都做一个外控,是目的片段外的另一段保守序列,它如果能扩出来,阳性质控也能扩出来,就说明试剂没问题。如果外控不出,阳性也不出,说明试剂有问题。如果外控不出,阳性出,说明样本有抑制剂。不知道理解的对不对?如果是这样,还有必要加内控吗?

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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4楼2015-02-10 16:48:20
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