应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PBI121 与目的片段连接后转入DH5α，长出的菌落提取质粒都是空载，求原因
51/1返回列表
查看: 4572  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

spirit_free

金虫 (小有名气)

[求助] PBI121 与目的片段连接后转入DH5α，长出的菌落提取质粒都是空载，求原因 已有3人参与

我是将PBI121载体与目的片段分别双酶切后电泳，切胶回收，再做连接的。PBI121双酶切是切去GUS基因（约1.8kb），要连接的目的片段是113bp，用连接后的产物转化DH5α，挑取得到的菌落，摇菌提质粒，得到的质粒是含有GUS基因的PBI121，而不是我预期的到的pbi121与目的片段的连接产物。求各位帮忙分析原因。另外求教怎样提高PBI121与目标片段的连接成功率，是不是我的目标片段太小了因此与PBI121连接比较困难。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

风随心动

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-30 16:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guanhr515

新虫 (初入文坛)
亲，我现在也想构建重组载体，可是我的pbi121质粒有问题，亲，可以接我一点点质粒或者菌液，如若提供。不胜感激，货到付款

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-06 11:20:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:56:28
spirit_free: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-02-02 00:11:49
载体酶切不充分，另外，通常100bp小片段回收效率都比较低，回收后电泳检测确保回收到了，关于连接体系可以提高大：小的摩尔浓度比，比如1：3，鉴定重组子先用菌液PCR粗筛，多挑些菌

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-30 17:23:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:56:35
spirit_free: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-02-02 00:11:59
构建重组质粒做转化时最好加对照，除了连接产物之外，用你酶切后的载体转化做对照，你酶切后的载体这个板是不是有菌落，如果有可以确定是你酶切的问题，如果没有，你再调整下你的载体和目的基因的比例
赞一下(2人) 回复此楼
医学&统计学
3楼2015-02-01 11:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

还重名啊

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接时间加长（16度过夜），提质粒之前先菌P，筛选的时候板抗生素浓度提高点
赞一下 回复此楼
4楼2015-02-01 23:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 导师吐槽：我怎么摊上了这么个极品研究生！ +9 苏东坡二世 2026-08-23 9/450 2026-08-29 14:41 by hustersqt
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 5/250 2026-08-29 14:24 by jCd0dEvKHShX
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 14:15 by jCd0dEvKHShX
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 4/200 2026-08-29 13:51 by jCd0dEvKHShX
[找工作] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 6/300 2026-08-29 11:29 by jCd0dEvKHShX
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-29 11:18 by jCd0dEvKHShX
[基金申请] 投票:  有多少人是今天查系统知道结果的？ +16 爱看书的可乐 2026-08-26 18/900 2026-08-29 10:18 by winsaint
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-29 09:26 by G6APbkg8SA6w
[基金申请] 系统查不到 +11 董八千 2026-08-26 11/550 2026-08-28 18:06 by Leogzhya
[基金申请] 基金未中，这种答复是模板吗？ +5 zhaosm1982 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:00 by lfy8008
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 我不理解！ +15 Edward_pc 2026-08-26 23/1150 2026-08-26 20:34 by zzuzxg
[基金申请] 2026年的国家社科基金项目通讯评审的新规则与新动向、新挑战 +7 process2012 2026-08-23 10/500 2026-08-26 19:23 by hmhminy
[基金申请] 出来了 +9 trojank 2026-08-26 9/450 2026-08-26 14:25 by 宝贝虫子
[基金申请] 国际合作可查了，中了面上 (EPI+1)(金币+50) +18 Ldrop2023 2026-08-26 18/900 2026-08-26 11:15 by cmrandy
[基金申请] 项目信息和经费信息在系统里都可以看到了 +6 wittyboy 2026-08-26 14/700 2026-08-26 10:55 by wittyboy
[基金申请] 今天务委会开完了，明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 牛来！米来！面来！ +8 beefly 2026-08-26 8/400 2026-08-26 08:37 by xuzhipiao
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +9 图啦图啦 2026-08-24 10/500 2026-08-25 11:59 by 南海小哥
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭