应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » PBI121 与目的片段连接后转入DH5α，长出的菌落提取质粒都是空载，求原因
61/1返回列表
查看: 4294  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

spirit_free

金虫 (小有名气)

[求助] PBI121 与目的片段连接后转入DH5α，长出的菌落提取质粒都是空载，求原因 已有3人参与

我是将PBI121载体与目的片段分别双酶切后电泳，切胶回收，再做连接的。PBI121双酶切是切去GUS基因（约1.8kb），要连接的目的片段是113bp，用连接后的产物转化DH5α，挑取得到的菌落，摇菌提质粒，得到的质粒是含有GUS基因的PBI121，而不是我预期的到的pbi121与目的片段的连接产物。求各位帮忙分析原因。另外求教怎样提高PBI121与目标片段的连接成功率，是不是我的目标片段太小了因此与PBI121连接比较困难。
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

风随心动

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2015-01-30 16:28:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:56:28
spirit_free: 金币+3, ★★★很有帮助 2015-02-02 00:11:49
载体酶切不充分，另外，通常100bp小片段回收效率都比较低，回收后电泳检测确保回收到了，关于连接体系可以提高大：小的摩尔浓度比，比如1：3，鉴定重组子先用菌液PCR粗筛，多挑些菌

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下 回复此楼
2楼2015-01-30 17:23:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-02-01 14:56:35
spirit_free: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-02-02 00:11:59
构建重组质粒做转化时最好加对照，除了连接产物之外，用你酶切后的载体转化做对照，你酶切后的载体这个板是不是有菌落，如果有可以确定是你酶切的问题，如果没有，你再调整下你的载体和目的基因的比例
赞一下(2人) 回复此楼
医学&统计学
3楼2015-02-01 11:00:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

还重名啊

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
连接时间加长（16度过夜），提质粒之前先菌P，筛选的时候板抗生素浓度提高点
赞一下 回复此楼
4楼2015-02-01 23:59:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风随心动

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
你好，请问我可以向你求助点PBI121质粒吗？原谅我如此厚脸皮，因为实验真的需要，谢谢。
赞一下 回复此楼
偶见繁星梦九天，只愿沧海桑田始如先。
5楼2015-10-20 12:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guanhr515

新虫 (初入文坛)
亲，我现在也想构建重组载体，可是我的pbi121质粒有问题，亲，可以接我一点点质粒或者菌液，如若提供。不胜感激，货到付款

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
6楼2016-04-06 11:20:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 spirit_free 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿哈工大，085400，320，求调剂 +4 gdlf9999 2026-03-24 4/200 2026-03-25 23:01 by boxking200
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 284求调剂 +15 Zhao anqi 2026-03-22 15/750 2026-03-25 12:51 by wht0531
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 085601求调剂总分293英一数二 +3 钢铁大炮 2026-03-24 3/150 2026-03-24 22:03 by bingxueer79
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[考研] 材料292调剂 +8 橘颂思美人 2026-03-23 8/400 2026-03-24 16:33 by laoshidan
[考研] 307求调剂 +3 余意卿 2026-03-21 6/300 2026-03-24 15:03 by 余意卿
[考研] 环境学硕288求调剂 +8 皮皮皮123456 2026-03-22 8/400 2026-03-23 23:47 by 热情沙漠
[考研] 361求调剂 +3 Glack 2026-03-22 3/150 2026-03-23 22:03 by fuyu_
[考研] 350求调剂 +6 weudhdk 2026-03-19 6/300 2026-03-23 15:47 by tangyuan0840221
[考研] 352求调剂 +3 大米饭！ 2026-03-22 3/150 2026-03-22 23:28 by king123！
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 材料求调剂 +5 @taotao 2026-03-21 5/250 2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 0703化学调剂 +4 妮妮ninicgb 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:39 by 学员8dgXkO
[考研] 296求调剂 +4 www_q 2026-03-20 4/200 2026-03-21 17:26 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 .m.. 2026-03-21 4/200 2026-03-21 16:25 by barlinike
[考研] 材料与化工（0856）304求 B区 调剂 +3 邱gl 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:47 by lature00
[考研] 一志愿苏州大学材料求调剂，总分315（英一） +5 sbdksD 2026-03-19 5/250 2026-03-20 22:10 by luoyongfeng
[考研] 261求B区调剂，科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭