| 查看: 2377 | 回复: 22 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
求助PCR扩增不出来的问题..... 已有11人参与
|
||
|
最近做分子实验PCR，总是做不出来，不知道哪位大侠能够指点一下.... PCR反应总体系为20 ul，其中包含： DNA（10 ng/ul） 3ul ； Primers（2 uM）上下游各3ul； Taq酶（5U/ul） 0.2ul； dNTP（1mM） 4ul ； 10Xbuffer（含Mg2+，1Xbuffer中含2mM） 2ul； ddH2O补齐至20ul。 该体系用做扩增叶绿体DNA时，完全没问题，但是在扩增核基因时，仅扩增出一次，就再也没扩增出来了。从扩增效果看，也并不是特别理想。以前做的时候，是用的公司提供的预混液mix，只需加入DNA、primers、Taq，拿水补齐就行了，且扩增结果稳定。现在用同样的扩增程序，可扩增结果怎么都出不来。试了很多次，更换引物（新合成的引物）、增加引物浓度（终浓度为0.3、0.5、1uM的都试过）、更换dNTP、更换DNA、增加DNA模版浓度（体系中30ng、40ng、50ng的都试过），但最终都是无结果。PCR扩增程序没问题的，因为之前用预混液做出来有结果的。只是现在没有条件了，没有再购买预混液了。 另外，不知道水是不是有问题？我做叶绿体基因的时候，扩增结果良好，扩增图谱比较清晰，但用同样的体系，只是更换引物，没有更换水，结果怎么都做不出来了，求大神帮忙..... |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有276人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 枯草芽孢杆菌PCR扩增不出来的问题
已经有16人回复
- 反向PCR扩不出来
已经有4人回复
- 高GC模版扩增不出条带，求PCR高手
已经有5人回复
- 请问大家PCR扩增的最长产物是多少bp
已经有10人回复
- 模版GC含量高，二级结构复杂，PCR扩不出来
已经有5人回复
- 竞争性等位特异性PCR扩增不出条带
已经有8人回复
- PCR大片段问题
已经有15人回复
- PCR扩增DNA序列无条带
已经有46人回复
- 荧光定量PCR设计了三对引物了，都扩增不出来，郁闷啊
已经有4人回复
- 进行点突变的pcr，不能扩增出产物
已经有3人回复
- RT-PCR的cDNA不能扩增出目的条带，只有内参基因能扩增出来
已经有14人回复
- PCR重复不出来
已经有20人回复
- 大片段PCR(2.1K)扩增求助
已经有12人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有34人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 反向PCR之单引物扩增，真悲剧
已经有15人回复
- 求助 土壤基因组 PCR 扩增问题
已经有30人回复
- PCR扩增出现的问题
已经有9人回复
- 求助！PCR扩增不出全长DNA序列怎么办？
已经有24人回复
- 【求助/交流】PCR扩增核心片段，再也扩不出来了，怎么办
已经有16人回复
9楼2015-01-23 09:29:35
红卫大兵
木虫 (正式写手)
- 应助: 177 (高中生)
- 金币: 1875.1
- 散金: 174
- 红花: 8
- 帖子: 358
- 在线: 167.5小时
- 虫号: 2147864
- 注册: 2012-11-26
- 性别: GG
- 专业: 植物进化生物学
2楼2015-01-21 22:46:14
3楼2015-01-22 00:08:21
18761615793
木虫 (正式写手)
小虫
- MolEPI: 1
- 应助: 172 (高中生)
- 金币: 646.4
- 散金: 170
- 红花: 16
- 帖子: 863
- 在线: 144.9小时
- 虫号: 3603131
- 注册: 2014-12-19
- 专业: 抗体工程学
4楼2015-01-22 11:04:07
100