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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 转化子送去测序失败？？？
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小比目鲨鱼

新虫 (初入文坛)

[求助] 转化子送去测序失败？？？ 已有3人参与

经过提取质粒电泳和质粒PCR电泳验证是转化成功的，可是送去测序说，要么没摇菌提取质粒失败，要么就是没有信号，这是怎么回事？？？各位如何看？？
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1楼 2015-01-14 16:33:51
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:21:53
这种情况以前常碰到，建议用试剂盒小提质粒，用pH9.0的ddH2O洗脱，送样测序。
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2楼2015-01-14 20:30:35
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-15 18:22:00
PCR鉴定有时会有假阳性，PCR阳性后通常会小提质粒做进一步验证后再去测序。
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3楼2015-01-15 08:43:48
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小比目鲨鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-01-15 08:43:48
PCR鉴定有时会有假阳性，PCR阳性后通常会小提质粒做进一步验证后再去测序。

是提质粒来PCR，证明有条带了，才送测序的。
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4楼2015-01-15 19:59:55
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小比目鲨鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by ptttmt at 2015-01-14 20:30:35
这种情况以前常碰到，建议用试剂盒小提质粒，用pH9.0的ddH2O洗脱，送样测序。

是用试剂盒提的，用PH9的ddH2O比elution好吗？送质粒去测还是送菌液去好？
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5楼2015-01-15 20:01:41
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ptttmt

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
小比目鲨鱼: 金币+5, ★★★很有帮助 2015-01-16 09:36:57
引用回帖:
5楼: Originally posted by 小比目鲨鱼 at 2015-01-15 20:01:41
是用试剂盒提的，用PH9的ddH2O比elution好吗？送质粒去测还是送菌液去好？...

测序是以PCR产物或质粒为模板的单个引物PCR，系统要求严格，用pH9的ddH2O洗脱，可以避免测序时模板带入的盐离子，以免对测序的反应体系带来潜在影响。测序公司要求，如果是客户自己纯化，用pH9的ddH2O洗脱。

质粒测序一般情况送菌液即可，不过像你这种情况测了多次摇不起来或没信号的，可以自己尝试纯化质粒测序。

另外，送质粒测可1天出结果，送菌液公司会先摇菌提质粒再测，大概要2天时间出结果。

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6楼2015-01-15 21:01:07
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红卫大兵

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你可以过夜摇好直接叫他们来取，直接测序就行啊。很正常的
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7楼2015-01-15 21:29:47
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 小比目鲨鱼 at 2015-01-15 19:59:55
是提质粒来PCR，证明有条带了，才送测序的。...

直接把提出来的质粒送测序。
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8楼2015-01-15 23:27:29
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小比目鲨鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 红卫大兵 at 2015-01-15 21:29:47
你可以过夜摇好直接叫他们来取，直接测序就行啊。很正常的

最快的顺丰不能寄液体，能寄液体的又比较慢的
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9楼2015-01-16 09:41:00
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小比目鲨鱼

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2015-01-15 23:27:29
直接把提出来的质粒送测序。...

考虑看看，但是送多少体积合适？
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10楼2015-01-16 09:43:51
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