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yangqingxy

铜虫 (小有名气)

[求助] issr-pcr电泳图,哪个温度好呢? 已有1人参与

以下是某三个单一引物的10个温度的issr-pcr电泳图谱,请问哪个退火温度较好呢?多谢!

issr-pcr电泳图,哪个温度好呢?
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issr-pcr电泳图,哪个温度好呢?-1
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issr-pcr电泳图,哪个温度好呢?-2
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香,分子生物期待你更多精彩。 2015-01-11 15:37:33
你问的是每一条引物的最适温度还是三条引物共同的最适温度?确定最适温度只需看目的条带特异性如何,带清晰明亮,并且杂带较少,无弥散非特性条带即可!祝好!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
2楼2015-01-11 00:12:46
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 00:12:46
你问的是每一条引物的最适温度还是三条引物共同的最适温度?确定最适温度只需看目的条带特异性如何,带清晰明亮,并且杂带较少,无弥散非特性条带即可!祝好!

我问的是每一条引物的最适温度是多少?知道引物,知道提的DNA的分子量和大小,怎么知道扩增的目的条带的大小呀?多谢回复,很想想您学习
3楼2015-01-11 22:01:30
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-11 22:01:30
我问的是每一条引物的最适温度是多少?知道引物,知道提的DNA的分子量和大小,怎么知道扩增的目的条带的大小呀?多谢回复,很想想您学习...

你设计的引物肯定是针对某一特定序列的,根据marker已知的大小和目的条带的位置就知道其大小了,这些最基本的知识,你可以自己找相关书籍查阅就ok了!

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
4楼2015-01-11 22:07:00
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 22:07:00
你设计的引物肯定是针对某一特定序列的,根据marker已知的大小和目的条带的位置就知道其大小了,这些最基本的知识,你可以自己找相关书籍查阅就ok了!...

引物没有设计,用的是UBC中的100条issr引物,现在在进行引物筛选,怎么知道扩增的目的条带大小呢?
5楼2015-01-12 07:59:37
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-12 07:59:37
引物没有设计,用的是UBC中的100条issr引物,现在在进行引物筛选,怎么知道扩增的目的条带大小呢?...

目的条带是根据你实验目的来的,你筛选引物为了找寻特异性引物吧?你做的实验是做聚类分析,判段亲缘关系远近吗?

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
6楼2015-01-12 17:26:03
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-12 17:26:03
目的条带是根据你实验目的来的,你筛选引物为了找寻特异性引物吧?你做的实验是做聚类分析,判段亲缘关系远近吗?...

是的,你说的很对,我想向您学习,我的PCR结果如上三图,如何判断每一个引物的退火温度,以及如何改进我的实验呢?多谢回复
7楼2015-01-12 20:22:23
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867575969

至尊木虫 (著名写手)

One Piece

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
yangqingxy: 金币+10, ★有帮助 2015-01-13 21:56:10
引用回帖:
7楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-12 20:22:23
是的,你说的很对,我想向您学习,我的PCR结果如上三图,如何判断每一个引物的退火温度,以及如何改进我的实验呢?多谢回复...

这个很简单,根据你跑出来的图,只要看看条带的多少,明亮清晰度等,就可以知道该引物哪个温度合适了,一般简单点就是根据所给引物推荐的TM值上下加减几度来看所p的条带如何,以此来看该引物哪个温度合适!
有些东西因为得不到而变得美好,有些东西因为拥有而变得弥足珍贵!
8楼2015-01-12 22:05:05
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蝶~恋花

新虫 (小有名气)

你好!ISSR的引物还可以靠单一引物来摸索退火温度吗?就是一对引物的其中一条?请问你最后的结果怎么样呢?

发自小木虫IOS客户端
9楼2017-03-18 18:34:54
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