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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » issr-pcr电泳图，哪个温度好呢？
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)

[求助] issr-pcr电泳图，哪个温度好呢？已有1人参与

以下是某三个单一引物的10个温度的issr-pcr电泳图谱，请问哪个退火温度较好呢？多谢！

issr-pcr电泳图，哪个温度好呢？
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issr-pcr电泳图，哪个温度好呢？-1
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issr-pcr电泳图，哪个温度好呢？-2
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1楼2015-01-09 22:50:03
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 00:12:46
你问的是每一条引物的最适温度还是三条引物共同的最适温度？确定最适温度只需看目的条带特异性如何，带清晰明亮，并且杂带较少，无弥散非特性条带即可！祝好！

我问的是每一条引物的最适温度是多少？知道引物，知道提的DNA的分子量和大小，怎么知道扩增的目的条带的大小呀？多谢回复，很想想您学习
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3楼2015-01-11 22:01:30
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 22:07:00
你设计的引物肯定是针对某一特定序列的，根据marker已知的大小和目的条带的位置就知道其大小了，这些最基本的知识，你可以自己找相关书籍查阅就ok了！...

引物没有设计，用的是UBC中的100条issr引物，现在在进行引物筛选，怎么知道扩增的目的条带大小呢？
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5楼2015-01-12 07:59:37
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yangqingxy

铜虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-12 17:26:03
目的条带是根据你实验目的来的，你筛选引物为了找寻特异性引物吧？你做的实验是做聚类分析，判段亲缘关系远近吗？...

是的，你说的很对，我想向您学习，我的PCR结果如上三图，如何判断每一个引物的退火温度，以及如何改进我的实验呢？多谢回复
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7楼2015-01-12 20:22:23
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