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1楼2015-01-09 22:50:03

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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2015-01-11 15:37:33

你问的是每一条引物的最适温度还是三条引物共同的最适温度？确定最适温度只需看目的条带特异性如何，带清晰明亮，并且杂带较少，无弥散非特性条带即可！祝好！

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2楼2015-01-11 00:12:46

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2楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 00:12:46
你问的是每一条引物的最适温度还是三条引物共同的最适温度？确定最适温度只需看目的条带特异性如何，带清晰明亮，并且杂带较少，无弥散非特性条带即可！祝好！

我问的是每一条引物的最适温度是多少？知道引物，知道提的DNA的分子量和大小，怎么知道扩增的目的条带的大小呀？多谢回复，很想想您学习

3楼2015-01-11 22:01:30

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3楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-11 22:01:30
我问的是每一条引物的最适温度是多少？知道引物，知道提的DNA的分子量和大小，怎么知道扩增的目的条带的大小呀？多谢回复，很想想您学习...

你设计的引物肯定是针对某一特定序列的，根据marker已知的大小和目的条带的位置就知道其大小了，这些最基本的知识，你可以自己找相关书籍查阅就ok了！

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4楼2015-01-11 22:07:00

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4楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-11 22:07:00
你设计的引物肯定是针对某一特定序列的，根据marker已知的大小和目的条带的位置就知道其大小了，这些最基本的知识，你可以自己找相关书籍查阅就ok了！

...

引物没有设计，用的是UBC中的100条issr引物，现在在进行引物筛选，怎么知道扩增的目的条带大小呢？

5楼2015-01-12 07:59:37

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5楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-12 07:59:37
引物没有设计，用的是UBC中的100条issr引物，现在在进行引物筛选，怎么知道扩增的目的条带大小呢？...

目的条带是根据你实验目的来的，你筛选引物为了找寻特异性引物吧？你做的实验是做聚类分析，判段亲缘关系远近吗？

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6楼2015-01-12 17:26:03

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6楼: Originally posted by 867575969 at 2015-01-12 17:26:03
目的条带是根据你实验目的来的，你筛选引物为了找寻特异性引物吧？你做的实验是做聚类分析，判段亲缘关系远近吗？

...

是的，你说的很对，我想向您学习，我的PCR结果如上三图，如何判断每一个引物的退火温度，以及如何改进我的实验呢？多谢回复

7楼2015-01-12 20:22:23

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yangqingxy: 金币+10, ★有帮助 2015-01-13 21:56:10

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7楼: Originally posted by yangqingxy at 2015-01-12 20:22:23
是的，你说的很对，我想向您学习，我的PCR结果如上三图，如何判断每一个引物的退火温度，以及如何改进我的实验呢？多谢回复...

这个很简单，根据你跑出来的图，只要看看条带的多少，明亮清晰度等，就可以知道该引物哪个温度合适了，一般简单点就是根据所给引物推荐的TM值上下加减几度来看所p的条带如何，以此来看该引物哪个温度合适！

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8楼2015-01-12 22:05:05

蝶~恋花

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你好！ISSR的引物还可以靠单一引物来摸索退火温度吗？就是一对引物的其中一条？请问你最后的结果怎么样呢？

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9楼2017-03-18 18:34:54