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95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转化进入DH5α鉴定正确后提质粒10ul再转入BL21(DE3)中,还需要做鉴定吗 已有1人参与

如题,本人新手,从DH5α中提取质粒酶切,PCR、测序鉴定正确,将重组质粒10ul 再转入BL21(DE3),涂板,还用不用再挑菌 提质粒、PCR、酶切、测序鉴定啊?  直接摇菌至OD 600=0.6加IPTG诱导可以吗?
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
95846713: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-04 20:06:04
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-04 21:18:46
不用再鉴定啦,直接诱导蛋白表达,然后跑PAGE胶鉴定蛋白大小即可,同时要注意有一个空载质粒的对照,如果只有转重组质粒的那个组有空载组没有的蛋白表达,且蛋白大小对,就基本能确定这个蛋白是你想要的目的蛋白了,再做大诱,纯化蛋白即可
医学&统计学
2楼2015-01-04 15:45:56
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