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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组质粒转化进入DH5α鉴定正确后提质粒10ul再转入BL21（DE3）中，还需要做鉴定吗
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95846713

新虫 (初入文坛)

[求助] 重组质粒转化进入DH5α鉴定正确后提质粒10ul再转入BL21（DE3）中，还需要做鉴定吗 已有1人参与

如题，本人新手，从DH5α中提取质粒酶切，PCR、测序鉴定正确，将重组质粒10ul 再转入BL21（DE3），涂板，还用不用再挑菌 提质粒、PCR、酶切、测序鉴定啊？  直接摇菌至OD 600=0.6加IPTG诱导可以吗？
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1楼 2014-12-30 14:39:18
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董博士

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
95846713: 金币+5, ★★★★★最佳答案 2015-01-04 20:06:04
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-01-04 21:18:46
不用再鉴定啦，直接诱导蛋白表达，然后跑PAGE胶鉴定蛋白大小即可，同时要注意有一个空载质粒的对照，如果只有转重组质粒的那个组有空载组没有的蛋白表达，且蛋白大小对，就基本能确定这个蛋白是你想要的目的蛋白了，再做大诱，纯化蛋白即可
赞一下(2人) 回复此楼
医学&统计学
2楼2015-01-04 15:45:56
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