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酷炫飙车

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌BL21转化问题 已有3人参与

采用的载体是PET32a和目的基因的重组质粒。转化后筛选平板上没有出现菌落。但在相同条件下PET32a的空载体转化成功。请问有哪些可能的原因,如何解决?
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cauobama

新虫 (著名写手)

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laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2014-04-02 22:52:27
测序正确?没有把抗性基因破坏?另外很有可能质粒没有转进去,多做几次试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
2楼2014-04-02 09:26:28
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励热心交流! 2014-04-02 22:52:51
PET32a和目的基因的重组质粒?是做的酶切连接吧?注意酶切和连接的效率
相信自己
3楼2014-04-02 09:51:48
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cauobama at 2014-04-02 09:26:28
测序正确?没有把抗性基因破坏?另外很有可能质粒没有转进去,多做几次试试。

我们的重组质粒转化效率比较低,前面成功过,并且重组质粒经过Amp抗性验证,没有丢失抗性基因。
4楼2014-04-02 10:00:08
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by l68266152 at 2014-04-02 09:51:48
PET32a和目的基因的重组质粒?是做的酶切连接吧?注意酶切和连接的效率

重组质粒是直接由生物公司合成的。不是由我们实验室构建的。
5楼2014-04-02 10:01:44
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

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酷炫飙车(dllchina代发): 金币+1, 多多交流 2014-04-08 09:15:13
先把质粒转化克隆用的大肠杆菌,从中重新提取质粒,再转化BL21。

你的外源序列可能对BL21有影响,比如紊乱代谢、致死等。
6楼2014-04-03 09:52:16
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