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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 大肠杆菌BL21转化问题
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)

[求助] 大肠杆菌BL21转化问题已有3人参与

采用的载体是PET32a和目的基因的重组质粒。转化后筛选平板上没有出现菌落。但在相同条件下PET32a的空载体转化成功。请问有哪些可能的原因，如何解决？
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1楼2014-04-02 09:16:54
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cauobama

新虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2014-04-02 22:52:27
测序正确?没有把抗性基因破坏?另外很有可能质粒没有转进去，多做几次试试。

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-04-02 09:26:28
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l68266152

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励热心交流！ 2014-04-02 22:52:51
PET32a和目的基因的重组质粒？是做的酶切连接吧？注意酶切和连接的效率
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相信自己
3楼2014-04-02 09:51:48
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cauobama at 2014-04-02 09:26:28
测序正确?没有把抗性基因破坏?另外很有可能质粒没有转进去，多做几次试试。

我们的重组质粒转化效率比较低，前面成功过，并且重组质粒经过Amp抗性验证，没有丢失抗性基因。
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4楼2014-04-02 10:00:08
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酷炫飙车

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by l68266152 at 2014-04-02 09:51:48
PET32a和目的基因的重组质粒？是做的酶切连接吧？注意酶切和连接的效率

重组质粒是直接由生物公司合成的。不是由我们实验室构建的。
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5楼2014-04-02 10:01:44
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aoaoshch

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
酷炫飙车(dllchina代发): 金币+1, 多多交流 2014-04-08 09:15:13
先把质粒转化克隆用的大肠杆菌，从中重新提取质粒，再转化BL21。

你的外源序列可能对BL21有影响，比如紊乱代谢、致死等。
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6楼2014-04-03 09:52:16
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