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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助 western blot
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searush

铜虫 (初入文坛)

[求助] 求助 western blot 已有4人参与

请问WB的内参怎么和样品一起跑胶，还有怎么定量蛋白样品及怎么保存蛋白？越具体越好，（本人是新手，求各位大虫帮帮忙）还有湿转60KD左右蛋白条件？
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学术研究
1楼 2014-12-25 21:55:25
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lavender_li

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

内参和样品一起跑胶是什么意思？你的蛋白质样品里不含有内参的蛋白质？
你是不是想说同一块膜看不同的蛋白质的意思？
如果是的话，内参和目标蛋白分子量差得多最好，直接切开就行了。
分子量如果相差不大就得reprobe ，把之前接的抗体全都洗下去。不过同一块膜reprobe 不要太多次
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10楼2015-03-24 12:22:40
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searush

铜虫 (初入文坛)
大虫们  帮帮忙吧
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学术研究
2楼2014-12-26 10:56:47
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mumu624

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
searush(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-26 20:21:57
目前测定蛋白浓度的方法有很多，BCA或者FOLIN-酚等方法都比较常用；如果是煮完的蛋白保存的话四度和-20度都可以，但是温度低的肯定保存时间长；60kD的蛋白湿转我们一般采用的是冰浴中，横流300mM，2h，效果不错。
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3楼2014-12-26 17:58:25
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searush

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by mumu624 at 2014-12-26 17:58:25
目前测定蛋白浓度的方法有很多，BCA或者FOLIN-酚等方法都比较常用；如果是煮完的蛋白保存的话四度和-20度都可以，但是温度低的肯定保存时间长；60kD的蛋白湿转我们一般采用的是冰浴中，横流300mM，2h，效果不错。

请问蛋白怎么变性保存 需要跟上样缓冲液一起煮吗？上样缓冲液用非变性的缓冲液行吗？
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学术研究
4楼2014-12-27 17:12:14
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