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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)

[求助] RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事已有10人参与

劳驾各位老师
       我买的RT-PCR是两个盒子一个是提RNA的盒子,一个是RT-PCR反应的盒子。这个RT-PCR反应的盒子将反转录反应和PCR反应合为一步,具体操作就需要加盒子里的反应液(具体怎么配置的没说)、酶和模板就OK了,也就说正个反转录反应PCR反应的加样工作就完成了。我的问题是,开始按照说明书的步骤做:提RNA后进行RT-PCR反应跑胶结果空白对照、阴性对照、阳性对照及所有样品都有目的条带,只是阳性对照条带更亮、更粗,值得一提的是空白对照、阴性对照以及样品的条带亮度、粗细都差不多。后来为了排除提RNA过程的操作问题我没提RNA直接在RT-PCR反应液里分别加无酶水、阴性和阳性对照,结果还是都跑出了目的条带而且条带亮度、粗细基本一致。请问各位老师是厂家的RT-PCR反应的盒子有问题,还是别的其他什么原因?感谢各位,圣诞快乐!!!
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lxf921227

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

兄弟 你这个问题是怎么解决的  我也碰到了这个问题 无模板对照跑出目的大小的条带(引物新合成,水新拆封 takara,mix 新拆 康为的,枪头带滤芯 无菌无酶的,所有操作都在超净工作台进行) 不胜感激
19楼2017-05-19 18:13:18
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