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落叶拾忆

新虫 (初入文坛)

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[求助] RT-PCR反应空白对照和阴性对照都P出条带了是怎么回事已有10人参与

劳驾各位老师

：
我买的RT-PCR是两个盒子一个是提RNA的盒子，一个是RT-PCR反应的盒子。这个RT-PCR反应的盒子将反转录反应和PCR反应合为一步，具体操作就需要加盒子里的反应液（具体怎么配置的没说）、酶和模板就OK了，也就说正个反转录反应PCR反应的加样工作就完成了。我的问题是，开始按照说明书的步骤做：提RNA后进行RT-PCR反应跑胶结果空白对照、阴性对照、阳性对照及所有样品都有目的条带，只是阳性对照条带更亮、更粗，值得一提的是空白对照、阴性对照以及样品的条带亮度、粗细都差不多。后来为了排除提RNA过程的操作问题我没提RNA直接在RT-PCR反应液里分别加无酶水、阴性和阳性对照，结果还是都跑出了目的条带而且条带亮度、粗细基本一致。请问各位老师是厂家的RT-PCR反应的盒子有问题，还是别的其他什么原因？感谢各位，圣诞快乐

！！！

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1楼 2014-12-25 16:20:59

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lf6220

至尊木虫 (著名写手)

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【答案】应助回帖

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同意楼上的说法，是引物的非特异性扩増，导致阴性对照有条带

[ 发自小木虫客户端 ]

10楼2014-12-27 07:41:30

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