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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上

[求助] PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？ 已有9人参与

RT-PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮，只有很浅的目的条带，但marker跑得挺好的，是什么原因呢？
  麻烦见过这种现象的大神留下脚印，小女子不胜感激。
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
1楼 2014-12-15 22:20:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

gangouyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:39:47
重新合成cDNA吧。
初步判断可能是基因组污染了，因为从点样孔一直到目的条带出现严重拖尾，表明各种大小的片段都有。
建议：1.重新用试剂盒提取RNA，再合成cDNA。2.如果不想提RNA，那么合成cDNA的时候，DNaseI处理的时间要加长。3.合成cDNA的时候RNA多加一点。4.合成cDNA的时候42°C的时间如果1h不够，可以延长至1.5h或者2h。
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20楼2014-12-17 23:57:19
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
2楼: Originally posted by caihang at 2014-12-15 22:40:27
没图，不好分析。

这是图，麻烦亲
PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
UVP00089Nov132014_副本.jpg
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
4楼2014-12-16 08:38:16
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普通回帖

caihang

铜虫 (小有名气)
没图，不好分析。
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2楼2014-12-15 22:40:27
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jjf139

金虫 (著名写手)

新药研发&药物分析
商家已经主动声明此回帖可能含有宣传内容
得有图有真相，呵呵！

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2014-12-16 07:39:31
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
3楼: Originally posted by jjf139 at 2014-12-16 07:39:31
得有图有真相，呵呵！

这是图，最近的PCR都是这种情况，麻烦亲分析一下
PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？-1
UVP00089Nov132014_副本.jpg
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
5楼2014-12-16 08:39:50
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z631535213

木虫 (正式写手)
MARK，等回复学习下
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6楼2014-12-16 08:51:41
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邹丽芳

银虫 (初入文坛)
我也遇到这样的问题，求助
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7楼2014-12-16 10:35:03
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lingsheshidu

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主用的模板是什么，有可能是模板浓度过高。或者其它某种成分如Mg2+浓度太高了。
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积累知识，抓紧奋斗！
8楼2014-12-16 10:42:32
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searush

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
这么好的例子  怎么没有高手分析下呢  期待中
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学术研究
9楼2014-12-16 13:05:05
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
8楼: Originally posted by lingsheshidu at 2014-12-16 10:42:32
楼主用的模板是什么，有可能是模板浓度过高。或者其它某种成分如Mg2+浓度太高了。

模板是反转录过来的cDNA,用的是那种通用Buffer,镁离子已经加在里面了，10×Buffer就按50ul体系加5ulBuffer做的。
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
10楼2014-12-16 14:33:26
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