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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
16楼: Originally posted by 想学好的学渣 at 2014-12-17 13:10:10
我以前也是这样，后来发现问题cDNA降解或者是RNA质量不太好造成的，你提取的时候RNA的质量如何呢？我是植物方向的，后来重新提取RNA，我记得当时的260/280是2.0，260/230是2.1，然后是50ng/ul  ,都还可以，然后电泳 ...

非常谢谢，条件有限没有办法检测RNA的浓度，凝胶电泳检测时，18s和28s条带的亮度感觉差不多亮，这个是不是说明RNA的质量不够好
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
21楼2014-12-18 08:26:40
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
20楼: Originally posted by gangouyang at 2014-12-17 23:57:19
重新合成cDNA吧。
初步判断可能是基因组污染了，因为从点样孔一直到目的条带出现严重拖尾，表明各种大小的片段都有。
建议：1.重新用试剂盒提取RNA，再合成cDNA。2.如果不想提RNA，那么合成cDNA的时候，DNaseI处理 ...

非常谢谢，琼脂糖凝胶电泳检测显示28s和18s条带的亮度差不多一样，这是不是说明RNA的质量不好，还有，我是用试剂盒合成cDNA的，根据说明书上的步骤，怎么没有加DNase I这一步骤呢？要是我想加DNase I的话，应该在哪一步加呢？
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22楼2014-12-18 08:36:16
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yanmou

木虫 (正式写手)

cc
引用回帖:
12楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-12-16 20:13:14
谢谢，请问DNA弥散该怎样解决呢...

弥散说明有降解或者保存条件有问题，你反转录，看看是不是反转录过程，活着设置一下延伸温度时间等等

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hurry up
23楼2014-12-19 00:39:32
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wt29088

木虫 (小有名气)
以前抽提质粒时蛋白过多就会在泳道中出现
还有就是你的体系中可能混有基因组DNA，太大跑不下去
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24楼2014-12-19 08:59:57
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
23楼: Originally posted by yanmou at 2014-12-19 00:39:32
弥散说明有降解或者保存条件有问题，你反转录，看看是不是反转录过程，活着设置一下延伸温度时间等等
...

主要还是模板有问题，对么？
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25楼2014-12-19 14:11:03
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
24楼: Originally posted by wt29088 at 2014-12-19 08:59:57
以前抽提质粒时蛋白过多就会在泳道中出现
还有就是你的体系中可能混有基因组DNA，太大跑不下去

PCR体系的话，不是用基因组DNA做模板么？有不也是很正常吗？
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26楼2014-12-19 14:20:43
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yanmou

木虫 (正式写手)

cc
引用回帖:
25楼: Originally posted by wu-ke-da at 2014-12-19 14:11:03
主要还是模板有问题，对么？...

是的
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27楼2014-12-19 15:16:33
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hailang1987

木虫 (小有名气)
建议调整一下Tm值

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修身，齐家，治国，平天下
28楼2014-12-20 09:34:12
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