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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR产物琼脂糖凝胶电泳检测，泳道很亮是什么原因？
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yanmou

木虫 (正式写手)

cc

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:40:45
第一 DNA弥散，第二扩增循环有问题，

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hurry up
11楼2014-12-16 14:59:55
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wu-ke-da

金虫 (小有名气)

学习的路上
引用回帖:
11楼: Originally posted by yanmou at 2014-12-16 14:59:55
第一 DNA弥散，第二扩增循环有问题，

谢谢，请问DNA弥散该怎样解决呢
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喜欢生物，所以想好好研究下去！
12楼2014-12-16 20:13:14
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猫懒懒的鱼

金虫 (小有名气)
我本科时候做过～当时是抽自己的血搞的～想想就得劲～

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每天进步一点点
13楼2014-12-16 21:18:03
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匿名

用户注销 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:40:33
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14楼2014-12-16 21:33:36
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匿名

用户注销 (小有名气)
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15楼2014-12-16 21:34:39
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想学好的学渣

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:40:24
我以前也是这样，后来发现问题cDNA降解或者是RNA质量不太好造成的，你提取的时候RNA的质量如何呢？我是植物方向的，后来重新提取RNA，我记得当时的260/280是2.0，260/230是2.1，然后是50ng/ul  ,都还可以，然后电泳检测也明显2：1条带，用反转录试剂盒反转录出来的cDNA就没得问题了。我也是个小菜鸟，说的不对的勿怪哈
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16楼2014-12-17 13:10:10
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jingmi

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:40:15
可能是蛋白质太多了吧。杂质太多
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17楼2014-12-17 13:58:51
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hlx920422

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
wu-ke-da(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:40:06
可能是模板扩散了，或者你纯化没做好。。我是做测序的，遇到这种情况一般都是重新做。。。。
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18楼2014-12-17 14:03:48
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wyzl2007

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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wu-ke-da(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:39:56
1,成像爆光时间过长；2．PCR体系需要优化
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19楼2014-12-17 23:26:20
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gangouyang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
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myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2014-12-18 22:39:47
重新合成cDNA吧。
初步判断可能是基因组污染了，因为从点样孔一直到目的条带出现严重拖尾，表明各种大小的片段都有。
建议：1.重新用试剂盒提取RNA，再合成cDNA。2.如果不想提RNA，那么合成cDNA的时候，DNaseI处理的时间要加长。3.合成cDNA的时候RNA多加一点。4.合成cDNA的时候42°C的时间如果1h不够，可以延长至1.5h或者2h。
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20楼2014-12-17 23:57:19
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