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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线!!! 已有1人参与

如图所示,最近做的一直出现这样的问题,存在非特异性条带,但去年做的时候是没有的,而且斜率和E值一直不对,E值基本都在60-70左右,现在图上的RFU信号基数我是乱弄的,是203,但是存在的问题是:
1、非特异性条带的产生是和引物存放时间或质量有关系吗?
2、由图上看到PCR管一放进去还没开始反应了就检测到信号了?(费解啊)

恳请大家“集思”、“广议”帮我解决一下

请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线!!!
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线!!!-1
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线!!!-2
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线!!!-3
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

非特异条带肯定与引物有关,包括退火温度等。
你起点高是因为浓度太高。
什么叫主峰中顶点差距远。。
3楼2014-12-24 11:17:25
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

为什么没人回复呢,扩增曲线刚开始时信号较强已找到原因,就是不明白主峰中的各个样品顶点差距那么远?和引物有关系吗?求帮忙!!!
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
2楼2014-12-23 22:09:58
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-24 11:17:25
非特异条带肯定与引物有关,包括退火温度等。
你起点高是因为浓度太高。
什么叫主峰中顶点差距远。。

就是说,熔解曲线峰中各个线的顶点之间的距离比较远,以前做的挨的都很紧,这是什么原因呢?
Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
4楼2014-12-29 20:57:34
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