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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

[求助] 请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！ 已有1人参与

如图所示，最近做的一直出现这样的问题，存在非特异性条带，但去年做的时候是没有的，而且斜率和E值一直不对，E值基本都在60-70左右，现在图上的RFU信号基数我是乱弄的，是203，但是存在的问题是：
1、非特异性条带的产生是和引物存放时间或质量有关系吗？
2、由图上看到PCR管一放进去还没开始反应了就检测到信号了？（费解啊）

恳请大家“集思”、“广议”帮我解决一下

请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！-1
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！-2
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请大家帮忙分析一下绝对定量的曲线！！！-3
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1楼 2014-12-14 01:13:55
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bbqlhb

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

非特异条带肯定与引物有关，包括退火温度等。
你起点高是因为浓度太高。
什么叫主峰中顶点差距远。。
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3楼2014-12-24 11:17:25
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
为什么没人回复呢，扩增曲线刚开始时信号较强已找到原因，就是不明白主峰中的各个样品顶点差距那么远？和引物有关系吗？求帮忙！！！
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
2楼2014-12-23 22:09:58
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by bbqlhb at 2014-12-24 11:17:25
非特异条带肯定与引物有关，包括退火温度等。
你起点高是因为浓度太高。
什么叫主峰中顶点差距远。。

就是说，熔解曲线峰中各个线的顶点之间的距离比较远，以前做的挨的都很紧，这是什么原因呢？
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
4楼2014-12-29 20:57:34
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