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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 溶解曲线出现很多杂峰
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Tao_zi

新虫 (初入文坛)

[求助] 溶解曲线出现很多杂峰 已有1人参与

目的基因的标准曲线做得没有问题，但是在做样品的荧光定量PCR时溶解曲线却出现了很多杂峰，想问一下究竟是什么原因？急求，谢谢！
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1楼 2014-09-04 10:34:15
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Tao_zi

新虫 (初入文坛)
我看了一下你提供的相关帖子，和我情况不大一样
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2楼2014-09-04 21:44:16
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2014-09-09 09:54:56
杂峰说明有非特异扩增产物，引物特异性不好，建议重新设计引物。
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3楼2014-09-05 10:22:07
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Tao_zi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liweiwei0812 at 2014-09-05 10:22:07
杂峰说明有非特异扩增产物，引物特异性不好，建议重新设计引物。

但是坐标线的时候没有任何问题呀，而且在荧光定量仪上摸索退火温度的时候也没有问题
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4楼2014-09-09 08:55:37
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Tao_zi

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by liweiwei0812 at 2014-09-05 10:22:07
杂峰说明有非特异扩增产物，引物特异性不好，建议重新设计引物。

但是在荧光定量仪上摸索退火温度的时候没有问题，做标准曲线的时候也没有问题
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5楼2014-09-09 08:56:50
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liweiwei0812

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Tao_zi at 2014-09-09 08:56:50
但是在荧光定量仪上摸索退火温度的时候没有问题，做标准曲线的时候也没有问题...

预实验的时候使用的是待测样本吗？建议先用待测样本进行预实验，实验后将PCR产物跑胶看一下，验证引物。验证引物主要看CT值是不是合适，熔解曲线是否有杂峰，确定没有问题以后再做标准曲线。
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6楼2014-09-11 16:30:15
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