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侠客王子梦

木虫 (小有名气)

[求助] 提取的RNA电泳图，都快崩溃了……已有5人参与

新手第一次提取RNA，已经试了好多次，但结果都不怎么样！感觉每一步的操作都是按照要求进行的，电泳是1×TAE缓冲液，微型电泳槽90V跑了13min……真心想知道还有哪些细节需要特别注意的！

提取的RNA电泳图，都快崩溃了……
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提取的RNA电泳图，都快崩溃了……-1
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提取的RNA电泳图，都快崩溃了……-2
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1楼2014-12-01 21:36:05
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Neo2000

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
降解了，你用什么方法提的，样品什么情况，细说来

[ 发自小木虫客户端 ]
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2楼2014-12-01 21:50:06
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侠客王子梦

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by Neo2000 at 2014-12-01 21:50:06
降解了，你用什么方法提的，样品什么情况，细说来

用trizon法，样品是大鼠的肝脏组织，样品一份是用样品保存液-20℃保存的，一份之前是在液氮中保存，前两天刚放进-80度冰箱！操作的时候我没有做液氮研磨这一步，直接加trizon匀浆的！
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3楼2014-12-01 21:54:14
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稻稻

铜虫 (著名写手)
★
侠客王子梦(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:50:01
是降解了。新手建议你刚开始一次少提几个样。我是做植物的，这半年提的质量都不好，不过前天换了另一家公司的提取液，就好了。可以做个平行对照实验找一下原因。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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做一个不动声色的人，不准情绪化，不准回头看。
4楼2014-12-01 23:06:48
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nculst

银虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
侠客王子梦(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-12-07 19:49:45
楼主是按Trizol说明书做的吗？中间是不是每加一次试剂就放置十几分钟的？你直接不放置或冰块中放置3min左右直接去离心试试，我后来是这样成功的。还有楼主的问题很有可能是组织块大，Trizol试剂只浸没了组织外表面，组织中间的RNA酶照常会降解，推荐用液氮研磨后再加Trizol提取。
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» 本帖已获得的红花（最新10朵）

侠客王子梦
5楼2014-12-07 10:01:59
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侠客王子梦

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by nculst at 2014-12-07 10:01:59
楼主是按Trizol说明书做的吗？中间是不是每加一次试剂就放置十几分钟的？你直接不放置或冰块中放置3min左右直接去离心试试，我后来是这样成功的。还有楼主的问题很有可能是组织块大，Trizol试剂只浸没了组织外表面， ...

好的，我试试！谢谢……
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6楼2014-12-10 16:47:59
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happydove

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

组织块儿一定不要大，液氮研磨速度要快，尽量不要让它融化了
还要避免空气中的酶降解  尽量在人流动少的地方操作
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7楼2014-12-10 17:17:37
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LiZhouya

禁虫
本帖内容被屏蔽
8楼2020-06-11 09:31:21
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qaz199018

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

建议trizol中研磨之后再冻起来
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~~~
9楼2020-06-12 20:55:52
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