| 查看: 787 | 回复: 3 | ||
[求助]
重组PCR 扩不出来需要的条带
|
|
总是出现不了需要的条带。杂带很多也很亮。 一个片段是EGFP基因（750bp），另一个片段长2.6kb。两个片段重叠15bp。 各自PCR之后切胶回收测浓度。按照摩尔比1:1加的模板。重组PCR的时候是先进行一轮8个循环的扩增（退火温度50℃），加Phusion酶不加引物。之后加引物进行第二轮扩增，退火温度从50到70的梯度。结果出来就是图片上这样。应该在3.4k左右有条带出现的。 引物一条是34个碱基 另一条60个碱基 Marker是250bp ladder 从上往下依次是5k 3k 2k 1.5k 1k 750 500 250 100 求赐教。第一次做重组PCR，不太了解哪里出问题了。  20141124重组PCR.jpg |
回复此楼» 猜你喜欢
为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种?
已经有5人回复
-
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》
已经有3人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有232人回复
-
求助 食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社 电子版
已经有5人回复
-
胶体几丁质的结晶度？
已经有0人回复
-
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士
已经有2人回复
-
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线
已经有5人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
反转录后PCR扩不出目的条带
已经有26人回复- PCR有时能出来带有时出不来
已经有24人回复
- 反向PCR扩不出来
已经有4人回复
- pcr开始有条带，后来怎样都没条带
已经有8人回复
- RED重组敲除基因，PCR验证时既有目的基因条带也有打靶片段条带
已经有18人回复
- 菌落PCR有目的条带，重组质粒提取PCR却没条带，请问是什么原因？
已经有13人回复
- 设计了简并引物，PCR扩不出条带
已经有9人回复
- 大片段PCR扩增求助
已经有23人回复
- 基因组无条带，PCR有条带
已经有3人回复
- 欲PCR扩增4200bp左右的目的片段，一直得不到目的条带，求高人指教！
已经有25人回复
- pcr目的条带暗，怎么办呢？？
已经有25人回复
- PCR扩增不出目的条带
已经有12人回复
- 急急急！诡异基因PCR扩不出来。。。
已经有6人回复
- PCR回收产物做PCR模板，为什么扩不出来
已经有8人回复
- 以酵母基因组为模板进行PCR扩增没有条带
已经有6人回复
- 求助，换了高保真酶扩不出来目的条带
已经有26人回复
- PCR重复不出来
已经有20人回复
- overlap PCR做不出来呐。。。。
已经有23人回复
- 做过用同源重组进行基因敲出的朋友请进，PCR做不出来！！
已经有16人回复
- PCR一直扩不出目的条带
已经有10人回复
- PCR扩不出目的基因
已经有14人回复
- 重组PCR验证时没有目的条带
已经有3人回复
- cDNA做普通PCR扩不出条带来
已经有13人回复
- 【求助/交流】pcr条带不亮
已经有6人回复
- 怎么扩不出来
已经有7人回复
炼水燎原
新虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 178.9
- 散金: 20
- 帖子: 97
- 在线: 52.1小时
- 虫号: 1465131
- 注册: 2011-10-28
- 专业: 神经科学、认知科学与心理
2楼2014-11-26 19:42:10
3楼2014-11-27 18:45:16
4楼2015-01-20 11:13:37