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重组PCR 扩不出来需要的条带
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总是出现不了需要的条带。杂带很多也很亮。 一个片段是EGFP基因（750bp），另一个片段长2.6kb。两个片段重叠15bp。 各自PCR之后切胶回收测浓度。按照摩尔比1:1加的模板。重组PCR的时候是先进行一轮8个循环的扩增（退火温度50℃），加Phusion酶不加引物。之后加引物进行第二轮扩增，退火温度从50到70的梯度。结果出来就是图片上这样。应该在3.4k左右有条带出现的。 引物一条是34个碱基 另一条60个碱基 Marker是250bp ladder 从上往下依次是5k 3k 2k 1.5k 1k 750 500 250 100 求赐教。第一次做重组PCR，不太了解哪里出问题了。  20141124重组PCR.jpg |
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4楼2015-01-20 11:13:37