版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 175.9
帖子: 48
在线: 6.3小时
虫号: 2300660
注册: 2013-02-26
专业: 动物遗传学

[求助] 请教各位，xho 1和sal 1双酶切重组质粒，切不开，已有2人参与

请教各位，xho 1和sal 1双酶切重组克隆载体，切下来目的条带，再往真核表达载体上连，根据测序结果是没连上，但是菌液PCR鉴定，目的条带P的很亮，如果没连到表达载体上的话，怎么能P 出来呢？后来知道他俩是同尾酶，这种情况该怎么办啊？

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有272人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

求助：EcoRI 和 XhoI双酶切已经有25人回复
质粒上的两个酶切位点紧挨着，双酶切能否切开已经有6人回复
Ecor Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切结果，目的条带有，可是另一条带比原来质粒还要大，怎么解释呢已经有6人回复
菌落PCR 之前能P出来，后来就重复不出来了已经有9人回复
单酶切切不开的原因？已经有8人回复
双酶切切出来三条带已经有31人回复
Sac1和Xho1的双酶切连接已经有5人回复
我用sal Ⅰ和xho Ⅰ双酶切链接目的基因，菌落pcr能p出目的条带，但酶切切不开。已经有18人回复
质粒双酶切BSA怎么加？已经有15人回复
有关NEB内切酶NdeI和XhoI的双酶切问题已经有6人回复
Nhe I和Hind III 双酶切pcDNA3.1(+)和目的片段2300bp，却连不上，求各位帮忙啊已经有17人回复
转化子太多假阳性，怎么办呀？已经有11人回复
请问Not I的酶切效率怎样，过夜酶切都没切开！！已经有17人回复
双酶切连TA后切不开已经有13人回复
【求助/交流】Xhol 酶切不能切开已经有13人回复

1楼2014-11-23 22:40:14

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

应助: 63 (初中生)
贵宾: 0.082
金币: 8956.3
散金: 1169
红花: 12
帖子: 3145
在线: 873.9小时
虫号: 714541
注册: 2009-03-04
性别: GG
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:20:37

根据测序结果比对一下，看看连的情况，是否为错连了还是什么其他情况。

2楼2014-11-25 15:14:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

cxy8023

银虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 294.1
帖子: 30
在线: 58.8小时
虫号: 3123577
注册: 2014-04-09
性别: GG
专业: 植物资源学

换一个酶

路漫漫其修远兮吾将上下而求索

3楼2015-12-06 17:16:48

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

wjasaa

金虫 (初入文坛)

应助: 3 (幼儿园)
金币: 842.5
帖子: 28
在线: 6.9小时
虫号: 3651526
注册: 2015-01-18
性别: GG
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

菌液PCR是可能得到假阳性的，原因会来自引物错配，反应体系污染，或者目标插入序列和空载体本身插入序列相似等。T4连接效率比较低，加上你这两个酶是同尾酶，用该方案几乎得不到阳性克隆。可以考虑换酶切位点，或者改用其他连接方式，具体你可以私信聊。

WWW.ABMGOOD.COM

4楼2015-12-07 11:17:42

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

相关版块跳转我要订阅楼主 qincaiyan615 的主题更新