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qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位,xho 1和sal 1双酶切重组质粒,切不开, 已有2人参与

请教各位,xho 1和sal 1双酶切重组克隆载体,切下来目的条带,再往真核表达载体上连,根据测序结果是没连上,但是菌液PCR鉴定,目的条带P的很亮,如果没连到表达载体上的话,怎么能P 出来呢?后来知道他俩是同尾酶,这种情况该怎么办啊?
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:20:37
根据测序结果比对一下,看看连的情况,是否为错连了还是什么其他情况。
2楼2014-11-25 15:14:09
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cxy8023

银虫 (初入文坛)

换一个酶
路漫漫其修远兮吾将上下而求索
3楼2015-12-06 17:16:48
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wjasaa

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

菌液PCR是可能得到假阳性的,原因会来自引物错配,反应体系污染,或者目标插入序列和空载体本身插入序列相似等。T4连接效率比较低,加上你这两个酶是同尾酶,用该方案几乎得不到阳性克隆。可以考虑换酶切位点,或者改用其他连接方式,具体你可以私信聊。
WWW.ABMGOOD.COM
4楼2015-12-07 11:17:42
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