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qincaiyan615

新虫 (初入文坛)

[求助] 请教各位，xho 1和sal 1双酶切重组质粒，切不开，已有2人参与

请教各位，xho 1和sal 1双酶切重组克隆载体，切下来目的条带，再往真核表达载体上连，根据测序结果是没连上，但是菌液PCR鉴定，目的条带P的很亮，如果没连到表达载体上的话，怎么能P 出来呢？后来知道他俩是同尾酶，这种情况该怎么办啊？
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1楼2014-11-23 22:40:14
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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
qincaiyan615(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-26 10:20:37
根据测序结果比对一下，看看连的情况，是否为错连了还是什么其他情况。
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2楼2014-11-25 15:14:09
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cxy8023

银虫 (初入文坛)
换一个酶
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路漫漫其修远兮吾将上下而求索
3楼2015-12-06 17:16:48
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wjasaa

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

菌液PCR是可能得到假阳性的，原因会来自引物错配，反应体系污染，或者目标插入序列和空载体本身插入序列相似等。T4连接效率比较低，加上你这两个酶是同尾酶，用该方案几乎得不到阳性克隆。可以考虑换酶切位点，或者改用其他连接方式，具体你可以私信聊。
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WWW.ABMGOOD.COM
4楼2015-12-07 11:17:42
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