应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 转化子太多假阳性，怎么办呀？
121/2返回列表12下一页
查看: 3446  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

cdmmore

铜虫 (小有名气)

[求助] 转化子太多假阳性，怎么办呀？

我用Nde1和Xho1双酶切pET28a和目的基因，连接转化后验证了15个转化子，都是空载体。1、还要不要继续验证呀？2、我两种酶是同时加的，同步酶切，这样有没有什么问题？3、为何会出现那么多空载体呀，怎么办？
先谢谢各位大侠啦！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-01-03 13:35:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-01-03 16:30:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-07 17:07:10
如果空载体很多，说明酶切有问题才连不上的。我觉得最好不要再验证了，从新酶切连接转化。
首先你要确定两个酶都是工作的。分别单切载体都能完全切开。
我也用NdeI做克隆，第一次也没有出。以我个人的经验，所有这些普通的克隆应该是one shot就差不多的。NdeI活性很强，时间稍长就会切过，酶也不要加多。我觉得你可以先不加NdeI切XhoI, 觉得切开了再加NdeI切20-30分钟就可以了。
赞一下 回复此楼
2楼2013-01-03 14:37:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-03 14:37:35
如果空载体很多，说明酶切有问题才连不上的。我觉得最好不要再验证了，从新酶切连接转化。
首先你要确定两个酶都是工作的。分别单切载体都能完全切开。
我也用NdeI做克隆，第一次也没有出。以我个人的经验，所有这 ...

谢谢这位高手的建议，下次这样试试。另外请教一下one shot是什么意思呀？
赞一下 回复此楼
3楼2013-01-03 16:32:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

egaoxy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★有帮助 2013-01-03 23:07:45
他的意思应该是没有星号活性吧
赞一下 回复此楼
4楼2013-01-03 21:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ccharlien

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-03 22:06:24
说明你pET28a的酶切不完全
所以转化出的大多是空的
减少空载体的量 确保酶切时间
赞一下 回复此楼
5楼2013-01-03 21:50:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by egaoxy at 2013-01-03 21:22:50
他的意思应该是没有星号活性吧

还是不太明白，也就是说克隆时没有星号活性就差不多了吗？就不怕酶切不完全吗
赞一下 回复此楼
6楼2013-01-03 23:07:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★有帮助, 谢谢 2013-01-04 10:30:01
推荐使用double digestion designer, 专门用于双酶切设计，可以精确计算酶切时所需的酶量，还可以推荐双酶切buffer，防止出现星活性。可以免费试用。小木虫推荐过，你可以找找，祝好运
赞一下 回复此楼
7楼2013-01-03 23:33:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by cdmmore at 2013-01-03 16:32:57
谢谢这位高手的建议，下次这样试试。另外请教一下one shot是什么意思呀？...

one shot就是一次成功呗。祝实验顺利。
赞一下 回复此楼
8楼2013-01-04 07:55:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuqin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+1, ★★★很有帮助, 谢谢 2013-01-04 12:56:02
小丹木木: 金币+2, 鼓励应助 2013-01-07 17:07:32
我想有两个问题吧：首先是酶切不完全，在确保内切酶好使的情况下，LZ可以减少质粒量，最好在酶切之前先把质粒高温煮2分钟然后冰浴使质粒变性；其次连接时掌握好大片段小片段的比例。
祝LZ好运！
赞一下 回复此楼
where there is a will,there ia a way.
9楼2013-01-04 09:31:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cdmmore

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-01-04 07:55:53
one shot就是一次成功呗。祝实验顺利。...

呵呵，谢谢
回复此楼
10楼2013-01-04 10:30:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 cdmmore 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 26考研一志愿中国石油大学(华东)305分求调剂 +3 嘉年新程 2026-03-15 3/150 2026-03-15 13:58 by 哈哈哈哈嘿嘿嘿
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 求调剂，药学 +3 归零lbm 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:21 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 312求调剂 +6 陌宸希 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:40 by JourneyLucky
[考研] 材料工程专硕，一志愿中国矿业大学，总分314，求调剂 +5 无懈可击的巨人 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:37 by JourneyLucky
[考研] 一志愿华中农业大学071010，总分三百二,求调剂 +3 困困困困坤坤 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:35 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +8 zchqwer 2026-03-10 8/400 2026-03-14 00:01 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +5 邱gl 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:37 by JourneyLucky
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 290求调剂 +7 ADT 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:17 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考博] 2026年博士申请 +3 QwQwQW10 2026-03-11 3/150 2026-03-12 17:58 by gxch43
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂材料专硕293 +6 段_(:з」∠)_ 2026-03-10 6/300 2026-03-10 18:22 by ms629
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭