| 查看: 3882 | 回复: 11 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
转化子太多假阳性，怎么办呀？
|
||
|
我用Nde1和Xho1双酶切pET28a和目的基因，连接转化后验证了15个转化子，都是空载体。1、还要不要继续验证呀？2、我两种酶是同时加的，同步酶切，这样有没有什么问题？3、为何会出现那么多空载体呀，怎么办？ 先谢谢各位大侠啦！ |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有283人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- Fosmid文库大片段的阳性克隆子筛选和测序问题
已经有18人回复
- 酵母转化假阳性
已经有11人回复
- 转化后阳性克隆长得比较慢是什么原因？！
已经有18人回复
- 大肠杆菌连接转化假阳性很多
已经有5人回复
- 革兰氏阳性菌感受态的制备及转化
已经有14人回复
- 红花转化，在组培时出现同根双株的植株，移植前是阳性，请请问这俩株现在有影响吗？
已经有6人回复
- 阳性克隆子被污染
已经有6人回复
- 基因敲除转化子验证
已经有5人回复
- 酵母阳性转化子筛选
已经有5人回复
- 亲们~谁做过酿酒酵母的转化，怎么筛选阳性克隆呢？
已经有5人回复
- PCR, southern 转基因植物阳性检测
已经有4人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌转化PCR鉴定，没有阳性菌落
已经有5人回复
- 【求助/交流】在线等：E.coli BL21 转化子在kan平板上要长多久
已经有8人回复
- 【求助/交流】革兰氏阳性菌的感受态细胞制备和转化
已经有9人回复
酶切专家
金虫 (小有名气)
- MolEPI: 2
- 应助: 96 (初中生)
- 金币: 1610.8
- 红花: 4
- 帖子: 149
- 在线: 41.3小时
- 虫号: 1648414
- 注册: 2012-02-27
- 性别: GG
- 专业: 生物大分子结构与功能
7楼2013-01-03 23:33:25
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-01-03 16:30:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-07 17:07:10
感谢参与，应助指数 +1
cdmmore: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢！ 2013-01-03 16:30:17
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2013-01-07 17:07:10
|
如果空载体很多，说明酶切有问题才连不上的。我觉得最好不要再验证了，从新酶切连接转化。 首先你要确定两个酶都是工作的。分别单切载体都能完全切开。 我也用NdeI做克隆，第一次也没有出。以我个人的经验，所有这些普通的克隆应该是one shot就差不多的。NdeI活性很强，时间稍长就会切过，酶也不要加多。我觉得你可以先不加NdeI切XhoI, 觉得切开了再加NdeI切20-30分钟就可以了。 |
2楼2013-01-03 14:37:35
3楼2013-01-03 16:32:57
egaoxy
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 9 (幼儿园)
- 金币: 6464.3
- 红花: 6
- 帖子: 2153
- 在线: 464.8小时
- 虫号: 497515
- 注册: 2008-02-02
- 专业: 生物大分子结构与功能
4楼2013-01-03 21:22:50
投票:
28