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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 巢式PCR空白对照第一轮没有条带，第二轮有条带！！
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR空白对照第一轮没有条带，第二轮有条带！！ 已有2人参与

各位大神：我做的是巢式PCR，电泳检测的结果是：
1、实验组：第一、第二轮都有条带
2、空白对照：第一轮没条带，第二轮有条带
DDH2O、枪头、PCR管、都是新灭菌的，PCR Mix也是刚开封的，这种情况出现2次了。到底是什么原因啊？
空白对照有条带，那一定是有污染吧，但是为什么第一轮没有只在第二轮有呢？第一轮P不出来？但是实验组第一轮有啊！是不是说明我的DNA是提出来了，只是实验过程中某些步骤污染了？
我提的是环境总DNA，要做高通量测序的，这样一来也不敢往下进行了。好惆怅，求高手指点！感激不尽！
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越努力越幸运
1楼 2014-11-16 14:47:12
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纯正天然

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
柠檬可乐星(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-16 22:21:30
第一轮后产物及空白对照稀释100-1000倍，并减少引物浓度试试。
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2楼2014-11-16 21:37:31
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 纯正天然 at 2014-11-16 21:37:31
第一轮后产物及空白对照稀释100-1000倍，并减少引物浓度试试。

您的意思是，第一轮空白可能也有污染？
但是同样条件下第一轮的空白没带，实验组有带，是不是说明实验组我的DNA至少是提出来了呢？
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越努力越幸运
3楼2014-11-17 08:00:43
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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
所有药品重配，不然枉费心机
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4楼2014-11-17 11:14:34
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:14:34
所有药品重配，不然枉费心机

关键现在不解的是，为什么实验组第一、二轮都有带，而空白第一轮没有，第二轮有，PS实验组条带比空白组亮得多
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越努力越幸运
5楼2014-11-17 16:35:45
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雷小木宠

新虫 (小有名气)
我现在也出现这个问题，请问你的问题解决了吗？

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6楼2019-08-06 22:43:46
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雷小木宠

新虫 (小有名气)
我现在也遇到了这个问题。请问是什么原因呢？

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7楼2019-08-06 22:44:13
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想上研究生。

新虫 (正式写手)
你好，请问这个问题是怎么解决的啊？

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8楼2021-03-09 17:40:16
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想上研究生。

新虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 雷小木宠 at 2019-08-06 22:44:13
我现在也遇到了这个问题。请问是什么原因呢？

你好，你这个问题解决了吗？

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9楼2021-03-09 17:40:35
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