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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

[求助] 巢式PCR空白对照第一轮没有条带,第二轮有条带!! 已有2人参与

各位大神:我做的是巢式PCR,电泳检测的结果是:
1、实验组:第一、第二轮都有条带
2、空白对照:第一轮没条带,第二轮有条带
DDH2O、枪头、PCR管、都是新灭菌的,PCR Mix也是刚开封的,这种情况出现2次了。到底是什么原因啊?
空白对照有条带,那一定是有污染吧,但是为什么第一轮没有只在第二轮有呢?第一轮P不出来?但是实验组第一轮有啊!是不是说明我的DNA是提出来了,只是实验过程中某些步骤污染了?
我提的是环境总DNA,要做高通量测序的,这样一来也不敢往下进行了。好惆怅,求高手指点!感激不尽!
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越努力越幸运
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by MLN10000 at 2014-11-17 11:14:34
所有药品重配,不然枉费心机

关键现在不解的是,为什么实验组第一、二轮都有带,而空白第一轮没有,第二轮有,PS实验组条带比空白组亮得多
越努力越幸运
5楼2014-11-17 16:35:45
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纯正天然

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
柠檬可乐星(西门吹雪170代发): 金币+1, 鼓励回帖交流 2014-11-16 22:21:30
第一轮后产物及空白对照稀释100-1000倍,并减少引物浓度试试。
2楼2014-11-16 21:37:31
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柠檬可乐星

新虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 纯正天然 at 2014-11-16 21:37:31
第一轮后产物及空白对照稀释100-1000倍,并减少引物浓度试试。

您的意思是,第一轮空白可能也有污染?
但是同样条件下第一轮的空白没带,实验组有带,是不是说明实验组我的DNA至少是提出来了呢?
越努力越幸运
3楼2014-11-17 08:00:43
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MLN10000

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
所有药品重配,不然枉费心机
4楼2014-11-17 11:14:34
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